着床前発生過程におけるcompactionの成立機構に関する研究

着床前发育过程中致密化形成机制的研究

基本信息

批准号：
61570010
负责人：
山村英樹
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570010/
关键词：
Compaction カルモデュリン Cキナーゼ W-7 W-5 PMA H-7 マウス

项目摘要

1.Compactionへの【Ca^(2+)】-カルモデュリンの関与(1)Compactionを起していない8細胞期のICRマウス胚を、正常培養液で4,8または12時間培養したところ、それぞれ56.6,82.5および88.6%の胚がcompactionを起した。同じ発生段階の胚をカルモデュリン阻害剤W-7添加(25μM)培養液で4,8または12時間培養した場合、compactionを起した胚の頻度はそれぞれ0.9,1.3およびO%であった。それに対して、カルモデュリンに対する親和性がW-7の1/9ないし1/7しかないW-5添加(25μM)培養液で同様の培養を行ったところ、4,8および12時間でそれぞれ22.0,51.5および60.3%の胚がcompactionを起した。(2)8細胞期のICRマウス胚を正常培養液で4時間培養してcompactionを起させたものを、25μMまたは50μMのW-7添加培養液で培養したところ、それぞれ2時間および8時間以内にcompactionしていない状態にもどった(decompaction)。これに対して、50μM以下のW-5を添加された培養液中では、胚のdecompactionは起らなかった。以上の結果は、compactionへの【Ca^(2+)】-カルモデュリンの関与を示唆している。2.CompactionへのCキナーゼの関与2,4または8細胞期のICRおよびB6C3【F_1】(C57BL/6×C3Hの【F_1】)マウス胚を、Cキナーゼ活性化作用を有するPMA1nM添加培養液で8ないし72時間培養したところ、分割が抑制されて発生の進行が遅れたが、compactionおよび胚盤胞形成は行われた。そこで、Cキナーゼの選択的阻害剤H-7(25μM)とPAM(1nM)とを同時に添加された培養液で胚を培養したところ、PMA単独添加による影響は消失せず、同じ影響が高度に現われた。すなわち、Cキナーゼがcompactionに関与するという証拠は得られなかった。今後、抗Cキナーゼ抗体を使ってさらに検討したい。

1. [Ca^(2+)]-钙调蛋白参与压缩 (1) 将未压缩的 8 细胞期 ICR 小鼠胚胎在正常培养基中培养 4、8 或 12 小时时、56.6%、82.5% 和 88.6% 的胚胎出现压缩。当同一发育阶段的胚胎在添加钙调蛋白抑制剂W-7（25μM）的培养基中培养4、8或12小时时，压缩频率分别为0.9、1.3和0%。另一方面，当使用添加W-5的培养基(25μM)进行类似培养时，其对钙调蛋白的亲和力仅为W-7的1/9至1/7，对钙调蛋白的亲和力为22.0 、51.5% 和 60.3% 的胚胎出现压缩。 (2)当ICR小鼠8细胞期胚胎在正常培养基中培养4小时以诱导致密时，在添加25μM或50μM W-7的培养基中培养，并在2小时和8小时内分别返回到未压缩（解压缩）的状态。相反，在补充有50μM或更少的W-5的培养基中没有发生胚胎解压。上述结果表明[Ca^(2+)]-钙调蛋白参与压实。 2. C 激酶参与压缩 ICR 和 B6C3 [F_1] (C57BL/6×C3H [F_1]) 小鼠胚胎在 2、4 或 8 细胞阶段在补充有 1 nM PMA 的培养基中培养，其具有a C激酶激活作用，培养8至72小时后，分裂受到抑制，发育进程延迟，但发生压缩和囊胚形成。因此，当在同时添加C激酶选择性抑制剂H-7(25μM)和PAM(1nM)的培养基中培养胚胎时，单独添加PMA的效果并没有消失，并且同样观察到了较高程度的效果。换句话说，没有获得C-激酶参与压缩的证据。将来，我们希望使用抗 C 激酶抗体进一步研究这一点。