胚の着床前発生におけるミオシン軽鎖キナーゼの調節機構に関する免疫組織化学的研究

胚胎着床前发育过程中肌球蛋白轻链激酶调控机制的免疫组化研究

基本信息

批准号：
06670020
负责人：
山村英樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスの着床前発生過程でのコンパクション及び胚盤胞腔形成におけるミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)の調節機構の一端を明らかにする目的で、8細胞胚及び桑実胚をMLCKの阻害剤であるML-9またはwortmanninに暴露し、胚細胞内のミオシン及びアクチンの分布について対照との比較を行った。1.対照の胚での所見DMSOを0.5%添加した培地で胚を12時間培養したところ、8細胞胚はコンパクションを起こして桑実胚となり、桑実胚は胚盤胞腔を形成して初期胚盤胞となった。培養終了後ミオシンの免疫組織化学的染色及びアクチンの特異的染色を胚に施したところ、ミオシンとアクチンは共存していて、胚の外側に面する細胞表層部及び細胞接触領域で、フィラメントの束と考えられる線状の分布を示した。ミオシンとアクチンの分布は、初期胚盤胞で桑実胚におけるよりもより整然としていた。2.MLCK阻害剤に暴露された胚での所見ML-9を25μMまたはwortmanninを15μM添加した培地で胚を12時間培養したところ8細胞胚はコンパクションを起こさず、桑実胚は脱コンパクションを起こして胚盤胞腔を形成しなかった。培養終了後ミオシンの免疫組織化学的染色及びアクチンの特異的染色を胚に施したところ、ミオシンとアクチンは、共存していたが、点状の不規則な分布を示した。wortmanninに暴露された胚では、アクチンのみが認められてミオシンの認められない細胞もあり、MLCKの可逆的阻害剤であるML-9よりも非可逆的阻害剤であるwortmanninの方がミオシン及びアクチンに対する影響が強かった。以上の結果から、MLCKのコンパクション及び胚盤胞腔形成への関与の仕方の1つとして、ミオシン及びアクチンからなる細胞骨格の維持が考えられる。

为了阐明小鼠植入前发育过程中肌球蛋白轻链激酶（MLCK）在压缩和囊胚腔形成过程中的部分调节机制，将8细胞胚胎和桑葚胚暴露于ML-9或渥曼青霉素后进行处理。将胚胎细胞中肌球蛋白和肌动蛋白的分布与对照进行比较。 1.对照胚胎中的发现当胚胎在补充有0.5%DMSO的培养基中培养12小时时，8细胞胚胎压实并成为桑葚胚，桑葚胚形成囊胚腔并发育成早期阶段。囊胚。培养后，对胚胎进行肌球蛋白免疫组化染色和肌动蛋白特异性染色，发现肌球蛋白和肌动蛋白共存，在面向胚胎外侧的细胞表层和细胞接触处形成丝束。它显示了被认为是线性分布。肌球蛋白和肌动蛋白在早期囊胚中的分布比桑葚胚中更加有序。 2.暴露于MLCK抑制剂的胚胎中的发现当胚胎在补充有25μM ML-9或15μM渥曼青霉素的培养基中培养12小时时，8细胞胚胎中没有发生压缩，但桑葚胚腔中发生了解压缩。没有形成。培养完成后对胚胎进行肌球蛋白免疫组织化学染色和肌动蛋白特异性染色，发现肌球蛋白和肌动蛋白共存，但呈不规则点状分布。在暴露于渥曼青霉素的胚胎中，一些细胞只表现出肌动蛋白而没有肌球蛋白，并且渥曼青霉素（MLCK的不可逆抑制剂）对肌球蛋白和肌动蛋白的抑制作用比ML-9（MLCK的可逆抑制剂）具有更强的影响。从上述结果来看，MLCK参与压实和囊胚腔形成的方式之一被认为是通过维持由肌球蛋白和肌动蛋白组成的细胞骨架。