抗腫瘍T細胞応答を調節する転写後制御機構の解析

调节抗肿瘤T细胞反应的转录后控制机制分析

• 批准号: 22KF0226
• 负责人: 竹内 理
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KF0226/
• 关键词: RNA分解酵素; 細胞傷害性T細胞

我々は、N4BP1たんぱく質がKHドメインとRNA分解酵素領域を持ち、HIV-1のRNAを分解することでウイルス感染制御に寄与することを報告してきた。本研究では、N4BP1の免疫細胞における役割を解析することを目的とした。まず、N4BP1欠損マウス由来のT細胞は加齢とともにエフェクタ―細胞が増加することが明らかとなった。CD4、CD8陽性T細胞ともに、エフェクタ―細胞の割合が増加したが、特にCD8陽性T細胞でその変化が顕著であった。また、N4BP1欠損マウスより脾臓、およびリンパ節からT細胞を単離した後のIn vitro解析で、N4BP1欠損CD8陽性T細胞の抗原刺激に対する増殖を細胞をCFSEで染色しその希釈をFACS解析により検討したところ、N4BP1欠損CD8陽性T細胞では、増殖が亢進することが明らかとなった。また、PMA刺激後のT細胞のインターフェロンγやグランザイムBの産生を細胞内染色とFACS解析により検討したところ、N4BP1欠損細胞では野生型に比べ亢進していた。また、MC38やB16などのがんを移植した際のがん免疫応答もN4BP1欠損マウスで亢進していた。野生型とN4BP1欠損CD8陽性T細胞のTranscriptome解析を行ったところ、Ly6c2など一連の遺伝子発現が亢進していることが明らかとなった。しかし、NFkB標的遺伝子には変化を認めなかった。また、N4BP1が核内に局在し、細胞質とShuttleしていることや、BioID法による結合分子の同定に成功した。今後、N4BP1により直接制御される遺伝子の解析を行っていく。

我们报道N4BP1蛋白具有KH结构域和RNA降解酶区域，并通过降解HIV-1 RNA而有助于控制病毒感染。在本研究中，我们旨在分析 N4BP1 在免疫细胞中的作用。首先，N4BP1缺陷小鼠的T细胞中的效应细胞随着年龄的增长而增加。 CD4和CD8阳性T细胞的效应细胞比例均增加，其中CD8阳性T细胞的变化尤其显着。此外，从 N4BP1 缺陷型小鼠的脾脏和淋巴结中分离 T 细胞后进行的体外分析表明，通过用 CFSE 染色细胞并稀释来检查 N4BP1 缺陷型 CD8 阳性 T 细胞响应抗原刺激的增殖情况。研究人员利用 FACS 分析发现，N4BP1 缺陷的 CD8 阳性 T 细胞增殖能力增强。此外，当我们使用细胞内染色和 FACS 分析检查 PMA 刺激后 T 细胞中干扰素 γ 和颗粒酶 B 的产生时，我们发现与野生型细胞相比，它们在 N4BP1 缺陷细胞中增强。此外，当移植 MC38 和 B16 等癌症时，N4BP1 缺陷小鼠的癌症免疫反应也得到增强。对野生型和 N4BP1 缺陷型 CD8 阳性 T 细胞的转录组分析表明，包括 Ly6c2 在内的一系列基因的表达增加。然而，NFkB 靶基因没有观察到变化。我们还发现N4BP1定位于细胞核并与细胞质穿梭，并利用BioID方法成功鉴定了结合分子。未来我们将分析N4BP1直接调控的基因。

项目成果

Critical roles of an endoribonuclease N4bp1 in regulating CD8 T cell homeostasis and cancer immunosurveillance

核糖核酸内切酶 N4bp1 在调节 CD8 T 细胞稳态和癌症免疫监视中的关键作用

• 发表时间: 2022
• 作者: Liu GH;Chong YK;Takeuchi O
• 通讯作者: Takeuchi O