抗腫瘍T細胞応答を調節する転写後制御機構の解析

调节抗肿瘤T细胞反应的转录后控制机制分析

• 批准号: 22KF0226
• 负责人: 竹内 理
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KF0226/
• 关键词: RNA分解酵素; 細胞傷害性T細胞

我々は、N4BP1たんぱく質がKHドメインとRNA分解酵素領域を持ち、HIV-1のRNAを分解することでウイルス感染制御に寄与することを報告してきた。本研究では、N4BP1の免疫細胞における役割を解析することを目的とした。まず、N4BP1欠損マウス由来のT細胞は加齢とともにエフェクタ―細胞が増加することが明らかとなった。CD4、CD8陽性T細胞ともに、エフェクタ―細胞の割合が増加したが、特にCD8陽性T細胞でその変化が顕著であった。また、N4BP1欠損マウスより脾臓、およびリンパ節からT細胞を単離した後のIn vitro解析で、N4BP1欠損CD8陽性T細胞の抗原刺激に対する増殖を細胞をCFSEで染色しその希釈をFACS解析により検討したところ、N4BP1欠損CD8陽性T細胞では、増殖が亢進することが明らかとなった。また、PMA刺激後のT細胞のインターフェロンγやグランザイムBの産生を細胞内染色とFACS解析により検討したところ、N4BP1欠損細胞では野生型に比べ亢進していた。また、MC38やB16などのがんを移植した際のがん免疫応答もN4BP1欠損マウスで亢進していた。野生型とN4BP1欠損CD8陽性T細胞のTranscriptome解析を行ったところ、Ly6c2など一連の遺伝子発現が亢進していることが明らかとなった。しかし、NFkB標的遺伝子には変化を認めなかった。また、N4BP1が核内に局在し、細胞質とShuttleしていることや、BioID法による結合分子の同定に成功した。今後、N4BP1により直接制御される遺伝子の解析を行っていく。

我们报告说，N4BP1蛋白具有KH结构域和RNA降解酶区域，并通过降解HIV-1 RNA有助于控制病毒感染。这项研究旨在分析N4BP1在免疫细胞中的作用。首先，揭示了效应细胞的数量随着N4BP1缺陷小鼠的T细胞年龄的增长而增加。 CD4和CD8阳性T细胞中效应细胞的比例增加，但在CD8阳性T细胞中的变化尤其明显。此外，从脾细胞中分离出T细胞后的体外分析，并从N4BP1缺乏的小鼠中淋巴结，用CFSE染色细胞，以通过FaceS Analless和ITS揭示了N4BP1缺乏的CD8阳性T细胞的增殖，以使抗原刺激的刺激的蛋白质揭示了抗原刺激的增殖。细胞。此外，当通过细胞内染色和FACS分析研究PMA刺激后，干扰素γ和颗粒酶B的产生时，N4BP1缺陷的细胞比野生型更明显。此外，在N4BP1缺陷型小鼠中，用癌症（如MC38和B16）移植时的癌症免疫反应也增加了。野生型和N4BP1缺陷的CD8阳性T细胞的转录组分析表明，包括LY6C2在内的一系列基因的表达增加了。但是，在NFKB靶基因中未观察到任何变化。此外，N4BP1位于细胞核中，与细胞质的班路相处，并通过生物体方法成功鉴定了结合分子。将来，我们将对直接受N4BP1调控的基因进行分析。

项目成果

Critical roles of an endoribonuclease N4bp1 in regulating CD8 T cell homeostasis and cancer immunosurveillance

核糖核酸内切酶 N4bp1 在调节 CD8 T 细胞稳态和癌症免疫监视中的关键作用

• 发表时间: 2022
• 作者: Liu GH;Chong YK;Takeuchi O
• 通讯作者: Takeuchi O