Control of immune responses via spatiotemporal regulation of mRNA decay

通过 mRNA 衰减的时空调节来控制免疫反应

基本信息

批准号：
18H04027
负责人：
竹内理
金额：
$ 28.7万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H04027/
关键词：
免疫応答 mRNA分解転写後制御自然免疫

项目摘要

１．Regnase-1複合体による免疫シグナル受容機構の解明；　Regnase-1はサイトカインなどのmRNA分解に重要であるが、その過程でリン酸化UPF1とRegnase-1が結合することが重要であることを明らかにしてきた。本研究では、まず、マクロファージをLPSで刺激すると、UPF1のT28リン酸化が誘導されていることを見出した。このリン酸化はT28に特異的であり、UPF1のC末端領域のリン酸化には変化を認めなかったことから、シグナル伝達の過程で、UPF1のT28リン酸化が特異的に誘導されていることが明らかとなった。２．Regnase-1およびRoquin時空間制御機構の解析；Regnase-1とRoquinはRNAと複合体を形成し機能しているが、免疫応答における各時期に、それぞれ他のどのような蛋白質と複合体を形成し機能しているのかは不明である。そこで、Regnase-1やRoquinに結合する蛋白質をビオチン化し質量分析を用いて網羅的に解析するBioID法を利用した。このために、Regnase-1と近接した蛋白質をビオチン化するため、BirAとRegnase-1に付加した蛋白質を発現させるベクターの作出に成功し、HEK293細胞においてこのプラスミドが発現することを確認した。3．免疫応答の転写後制御に関わる新規機能分子の同定； IL6の3’UTRをモデルにCRISPR-Cas9を用いたスクリーニングにより新たな転写後制御分子の同定を試みた。蛍光蛋白質であるLssmOrangeとEGFPを同一プロモーター下で双方向に転写し、EGFP遺伝子の下流にのみIL6の3’ UTRを導入したレポーターを発現するベクターの作製に成功した。また、Cas9発現K562細胞、および、gRNAライブラリー導入のシステムも確立した。

1。通过Regnase-1复合物阐明免疫信号接收机理； regnase-1对于mRNA降解（例如细胞因子）很重要，但已经表明，在此过程中结合磷酸化的UPF1和Regnase-1很重要。在这项研究中，我们首先发现用LPS刺激巨噬细胞诱导UPF1的T28磷酸化。这种磷酸化是对T28的特异性，在UPF1的C末端区域中未观察到磷酸化，表明UPF1的T28磷酸化在信号传导过程中是特异性诱导的。 2。雷宁1和Roquin时空调节的分析； Regnase-1和Roquin与RNA形成复合物并功能，但不清楚免疫反应中每个时期的其他蛋白质形成和功能。因此，我们使用了与regnase-1和roquin结合的生物素化蛋白的生物形象方法，并使用质谱进行了全面分析。为此，我们成功地创建了一个表达添加到BiRA和Regnase-1的蛋白的载体，以生物素化与Regnase-1接近的蛋白质，并确认该质粒在HEK293细胞中表达。 3。鉴定与免疫反应的转录后调控有关的新功能分子；我们试图通过使用IL6的3'UTR作为模型筛选使用CRISPR-CAS9来鉴定新的转录后调节分子。荧光蛋白LSSmorange和EGFP在同一启动子下方的两个方向上转录，并成功地创建了载体以表达一个报告者，该记者仅引入了EGFP基因下游的IL6的3'UTR。还建立了用于引入表达CAS9的K562细胞和GRNA库的系统。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Regnase-1によるmRNA分解を介した免疫制御機構

Regnase-1 降解 mRNA 介导的免疫控制机制

DOI：
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
Sogabe Yuko;Seno Hiroshi;Yamamoto Takuya;Yamada Yasuhiro;竹内　理
通讯作者：
竹内　理

mRNA分解による免疫調節機構とその制御

免疫调节机制及其mRNA降解控制

DOI：
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hou;M.;Hayashi;M.;Ashino;R.;Melin;A. D.;and Kawamura;S.;M. Igarashi;Masanobu Kano;竹内　理
通讯作者：
竹内　理

Pulmonary Regnase-1 orchestrates the interplay of epithelium and adaptive immune systems to protect against pneumonia

DOI：
10.1038/s41385-018-0024-5
发表时间：
2018-04
期刊：
Mucosal Immunology
影响因子：
8
作者：
Y. Nakatsuka;A. Vandenbon;Takashi Mino;Masanori Yoshinaga;Takuya Uehata;X. Cui;A. Sato;T. Tsujimura;Yutaka Suzuki;A. Sato;T. Handa;K. Chin;T. Sawa;T. Hirai;O. Takeuchi
通讯作者：
Y. Nakatsuka;A. Vandenbon;Takashi Mino;Masanori Yoshinaga;Takuya Uehata;X. Cui;A. Sato;T. Tsujimura;Yutaka Suzuki;A. Sato;T. Handa;K. Chin;T. Sawa;T. Hirai;O. Takeuchi

Posttranscriptional control of pro-inflammatory cytokine expression by Regnase-1 and Roquin

Regnase-1 和 Roquin 对促炎细胞因子表达的转录后控制

DOI：
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
Leung;C. S. Yang;K. Y. Li;X. Chan;V. W. Ku;M. Waldmann;H. Hori;S. Tsang;J. C. H. Lo;Y. M. D. Lui;K. O.;Osamu Takeuchi
通讯作者：
Osamu Takeuchi

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作者：
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竹内理其他文献

客観的心理測定に向けた圧電センサの適応可能性（Ⅱ）－コミュニケーション場面における英語スピーキング不安の測定－

压电传感器对客观心理测量的适应性（二）——测量沟通情境中的英语口语焦虑——

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
宝田隼;中川勇武;中村隼;鎌田浩輝;川村碧;植木美千子;脇田貴文;守谷順;柳美帆;黒木和明;天野航;武藤崇記;出口美樹;西尾玲;竹下皇二;竹内理;田實佳郎;宝田隼，中川勇武，中村隼，鎌田浩輝，川村碧，植木美千子，脇田貴文，守谷順，柳美帆，黒木和明，天野航，武藤崇記，出口美樹，竹内理，田實佳郎;池田　周;脇田貴文，植木美千子，宝田準，守谷順，柳美帆，黒木和明，天野航，武藤崇記，出口美樹，田實佳郎，竹内理
通讯作者：
脇田貴文，植木美千子，宝田準，守谷順，柳美帆，黒木和明，天野航，武藤崇記，出口美樹，田實佳郎，竹内理