In vivo comprehensive genome editing analysis to elucidate the mechanisms of cancer refractoriness for development of novel therapies

体内综合基因组编辑分析，阐明癌症难治性机制，以开发新疗法

基本信息

批准号：
22K19554
负责人：
田中真二
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

近年のゲノム編集技術の開発によって大きな技術革新が生まれており、治療開発への応用が期待されている。申請者は挑戦的研究(萌芽)H30-R1/R2-3年度により高効率多重ゲノム編集技術を開発し、ヒト・マウス初代培養細胞およびCAR-T細胞へ同時に複数の遺伝子変異を導入する革新的手法に成功した(Int J Cancer 2019, Carcinogenesis 2019, 2020, EBioMedicine 2020, Sci Rep 2021)。本研究では、高効率ゲノム編集技術をin vivo CRISPR/Cas9 sgRNA library導入へ応用し、膵癌細胞の網羅的ゲノム編集解析により転移能獲得機序を解明し、CAR-T細胞の網羅的ゲノム編集解析により膵癌組織への免疫浸潤機序を解明する。癌細胞および免疫細胞の両面から膵癌の難治性機序を明らかにして、新規治療法を開拓する挑戦的課題である。(1)膵癌細胞のin vivo網羅的ゲノム編集解析による転移能獲得機序の解明と治療開発C57BL/6マウス由来KrasG12DTrp53R172H膵癌株KPC (Dr. David Tuvesonより分与)にマウスsgRNA library (lentiCRISPRv2; 20,611遺伝子+Cas9)を導入して転移腫瘍を作成し、転移制御に関わる候補遺伝子群を抽出して、腫瘍免疫微小環境の解析を進めている。(2)CAR-T細胞のin vivo網羅的ゲノム編集解析による免疫浸潤機序の解明と治療開発膵癌を標的とするMSLN-CARベクターとマウスsgRNA library (lentiCRISPRv2)をC57BL/6マウスＴ細胞に導入し、MSLN+ KPCマウス膵癌を同所性移植した担癌マウスにCAR-T治療を施行して、免疫浸潤制御に関わる候補遺伝子群を抽出し、分子生物学的解析を進めている。

基因组编辑技术的最新发展带来了重大技术创新，有望应用于治疗开发。申请人通过挑战性研究（探索性）H30-R1/R2-3，开发出高效的多重基因组编辑技术，并开发出将多种基因突变同时引入人/小鼠原代培养细胞和CAR-T细胞的创新技术。该方法是成功的（Int J Cancer 2019、Carcinogenesis 2019、2020、EBioMedicine 2020、Sci Rep 2021）。本研究将高效基因组编辑技术应用于体内CRISPR/Cas9 sgRNA文库导入，通过对胰腺癌细胞的全面基因组编辑分析阐明了获得转移潜能的机制，并对CAR-T细胞进行了全面的基因组编辑分析。阐明免疫浸润胰腺癌组织的机制。从癌细胞和免疫细胞中揭示胰腺癌的难治机制并开发新的治疗方法是一项具有挑战性的任务。（1）通过体内全面的胰腺癌细胞基因组编辑分析阐明获得转移潜能的机制和治疗开发将C57BL/6小鼠来源的KrasG12DTrp53R172H胰腺癌细胞系KPC（由David Tuveson博士捐赠）与小鼠结合sgRNA 文库 (lentiCRISPRv2;我们正在通过引入20,611个基因+Cas9）来创建转移性肿瘤，提取与转移控制相关的候选基因，并进行肿瘤免疫微环境的分析。 (2) 通过对 CAR-T 细胞进行体内全面基因组编辑分析，并将靶向胰腺癌的 MSLN-CAR 载体和小鼠 sgRNA 文库 (lentiCRISPRv2) 引入 C57BL/6 小鼠 T 细胞，阐明免疫浸润机制和治疗开发对MSLN+KPC胰腺癌原位移植的荷瘤小鼠进行CAR-T治疗，提取了一组参与调节免疫浸润的候选基因，并正在进行分子生物学分析。

项目成果

期刊论文数量（24）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Biomarker research and clinical application for treatment of hepato-biliary-pancreatic cancer (Workshop)

肝胆胰癌治疗的生物标志物研究及临床应用（研讨会）

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Asano Daisuke;Kudo Atsushi;Akahoshi Keiichi;Maekawa Aya;Murase Yoshiki;Ogawa Kosuke;Ono Hiroaki;Ban Daisuke;Tanaka Shinji;Tanabe Minoru;Shinji Tanaka;Shinji Tanaka
通讯作者：
Shinji Tanaka

分子腫瘍医学研究室ホームページ

分子肿瘤学实验室主页

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

RTP4 silencing provokes tumor-intrinsic resistance to immune checkpoint blockade in colorectal cancer

RTP4沉默引发结直肠癌中肿瘤对免疫检查点阻断的内在抵抗

DOI：
10.1007/s00535-023-01969-w
发表时间：
2023
期刊：
Journal of Gastroenterology
影响因子：
6.3
作者：
Yamamoto Y;Shimada S;Akiyama Y;Tsukihara S;Sugimoto R;Kabashima A;Tokunaga M;Kinugasa Y;Kawakami Y;Tanaka S
通讯作者：
Tanaka S

Incidence and Mechanism of Refractory Postoperative Cholangitis After Hepatectomy with Hepaticojejunostomy