犬の肥満細胞腫におけるイマチニブ耐性化の分子病態の解明と耐性克服戦略の構築

阐明犬肥大细胞肿瘤伊马替尼耐药的分子发病机制并制定克服耐药性的策略

• 批准号: 13J10765
• 负责人: 小林 正人
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Nippon Veterinary and Life Science University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J10765/
• 关键词: 犬; 肥満細胞腫; イマチニブ; 耐性; ユビキチン; KIT; 二次変異; ERK

本年度は、犬の肥満細胞腫株化細胞CoMSから作製したイマチニブ耐性株rCoMS1で認められたKITの過剰発現が、イマチニブ耐性に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした。KIT分解能の解析により、rCoMS1で見られたKITの過剰発現はKITの分解遅延よってKITが蓄積した結果であることが明らかとなった。さらに、この反応はイマチニブの有無に伴って可逆性に起こることから、rCoMS1におけるKITの過剰発現は、イマチニブに対する反応性の変化であり、KITの細胞内動態の変化により生じると考えられた。rCoMS1におけるKITのユビキチン化の解析において、KITの発現が少ない細胞ではKITがユビキチン化しているのに対して、KITが過剰に発現している細胞ではKITのユビキチン化が明らかに減少していた。さらに、KITの過剰発現は細胞表面で認められたことから、rCoMS1で認められたKITの可逆性の過剰発現はイマチニブによりKITユビキチン化を可逆的に抑制し、その結果、細胞膜上でKITが増加したと考えられた。rCoMS1におけるKITリン酸化の解析とイマチニブの細胞増殖抑制試験により、KIT発現がわずかである細胞ではイマチニブによる明らかなKITリン酸化の抑制と細胞増殖の抑制が見られたが、KIT発現が過剰に増加した細胞ではいずれの抑制も見られなかった。このことから、KITの過剰発現は、CoMSのイマチニブ耐性化において中心的な役割を果たすことが明らかとなった。

今年，目的是阐明在犬肥大细胞细胞细胞系COM中产生的伊马替尼抗菌菌株RCOMS1中观察到的过表达的影响，对伊马替尼的抗性。分析试剂盒的分析表明，在RCOMS1中看到的试剂盒的过表达是由于试剂盒降解延迟引起的套件积累的结果。此外，由于这种反应是在伊马替尼的存在或不存在的情况下可逆地发生的，因此rcoms1中试剂盒的过表达是对伊马替尼的反应性的变化，被认为是由试剂盒内细胞内动力学的变化引起的。在RCOMS1中试剂盒泛素化的分析中，试剂盒在盒子表达的细胞中被泛素化，而在过度表达KIT的细胞中，KIT显然降低了试剂盒。此外，由于在细胞表面观察到了试剂盒的过表达，因此人们认为，在RCOMS1中观察到的KIT的可逆过表达可逆地抑制伊马替尼的Kit泛素化，从而导致细胞膜上的KIT增加。对伊马替尼的RCOMS1和细胞增殖抑制检验的试剂盒磷酸化的分析表明，在具有最小的KIT表达的细胞中，伊马替尼在细胞中清楚地抑制了磷酸化和细胞增殖，但在细胞中没有观察到过多的抑制作用。这表明套件的过表达在coms的伊马替尼抗性中起着核心作用。

项目成果

Molecular changes associated with the development of resistance to imatinib in an imatinib-sensitive canine neoplastic mast cell line carrying a KIT c.1523A>T mutation

携带 KIT c.1523A>T 突变的伊马替尼敏感犬肿瘤肥大细胞系中与伊马替尼耐药相关的分子变化

• DOI: 10.1111/ejh.12526
• 发表时间: 2015
• 期刊: Eur J Haematol.
• 作者: Kobayashi M;Kuroki S;Tanaka Y;Moriya Y;Kozutumi Y;Uehara Y;Ono K;Tamura K;Washizu T;Bonkobara M.
• 通讯作者: Bonkobara M.

イマチニブが奏効した犬の消化管間質腫瘍の1症例

一例对伊马替尼反应良好的狗胃肠道间质瘤病例

• 发表时间: 2013
• 作者: 小林正人;黒木詩織;伊藤慶太;安田暁子;澤田治美;小野憲一郎;鴛巣月美;盆子原誠
• 通讯作者: 盆子原誠

Molecular Changes Associated with the Development of Resistance to Imatinib in an Imatinib-Sensitive Canine Mast Cell Tumor Cell line

与伊马替尼敏感犬肥大细胞肿瘤细胞系中伊马替尼耐药性发展相关的分子变化

• 发表时间: 2014
• 作者: Kobayashi M;Kuroki S;Ito K;Uehara Y;Kozutumi Y;Tanaka Y;Moriya Y;Tamura K;Bonkobara M;Washizu T
• 通讯作者: Washizu T

Molecular cloning of canine co-chaperone small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein α (SGTA) and investigation of its ability to suppress androgen receptor signalling in androgen-independent prostate cancer.

犬共伴侣富含谷氨酰胺的小四肽重复蛋白 α (SGTA) 的分子克隆，并研究其在雄激素非依赖性前列腺癌中抑制雄激素受体信号传导的能力。

• DOI: 10.1016/j.tvjl.2015.08.002
• 发表时间: 2015
• 期刊: The Vwterinary Journal
• 作者: Kato;Y.;Ochiai;K.;Michishita;M.;Azakami;D.;Nakahira;R.;Morimatsu;M.;Ishiguro-Oonuma;T.;Yoshikawa;Y.;Kobayashi;M.;Bonkobara;M.;Kobayashi;M.;Takahashi;K.;Watanabe;M.;and Omi;T.
• 通讯作者: T.