培養肺胞上皮細胞気管内注入による肺病変修復促進の分子生物学的検索-水腫液吸収促進および人工サーファクタント併用による障害後細胞注入効果

气管内注射培养肺泡上皮细胞促进肺病灶修复的分子生物学研究-损伤后细胞注射促进水肿液吸收与人工表面活性剂联合作用

基本信息

批准号：
09877308
负责人：
須加原一博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.培養肺胞II型上皮細胞気管内投与による投与細胞の動態-ラット肺より肺胞II型上皮細胞を分離し、細胞が培養皿に付着しないようにバクテオロジカルデイシュに一日培養。この時細胞機能を維持するため、Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)腫瘍細胞外マトリックスをLab Techを用いて培養液中に浸して保持し、4-diamino-2-phenylindole(DAPl)を用いて細胞核を染色してから他のラット肺に気管内投与した。数日後ラット肺を凍結固定し、凍結切片を作成して蛍光顕微鏡にて観察すると投与した細胞が塊を作って肺胞壁に付着しており、形態的に以前の方法より活性の高い生きた細胞が確認された。DAPlでは凍結切片が必要なため、lipophilicdialkylcarbocyanines(Dil or DiD)を用いて、培養細胞を染色し気管内投与し、組織をパラホルムアルデハイドで固定し観察。投与細胞と組織細胞の区別が充分可能なことを確認できた。培養細胞を肺胞上皮細胞増殖因子であるKGFで、12時間刺激しDAPlあるいはDilで染色後、気管内投与してその動態を検索し、同様の結果を得ている。少し細胞障害があると思われるため、染色しない培養細胞を気管内投与し、投与肺を組織学的、電顕的に検索している。2.呼吸不全動物肺での細胞形態変化-エンドトキシン、ブレオマイシンや塩酸による障害ラットを作製し、KGFで刺激した培養肺胞II型上皮細胞を呼吸不全動物ラット肺に気管内投与し、その投与細胞の動態を検索しているが、肺水腫などが強いためか肺胞壁まで達していなく付着した細胞が少ない。最適投与時期を検索するため、経時的な変化を観察したが、4〜7日頃に投与した方が付着細胞は多いようだ。障害が進行しているため、付着細胞が脱落するのも観察された。3.KGF刺激培養肺胞上皮細胞と人工サーファクタント併用による肺障害抑制効果-肺障害後早期に人工サーファクタントを投与しその後培養細胞を投与すると付着細胞の増加がみられ、障害修復の促進が期待され現在検索中である。4.今後の展望-肺障害作製後人工呼吸管理を併用して(初期の肺水腫を抑えて)KGF刺激培養細胞を投与する研究も進行している。さらに、アデノウイルスを用いたgene transferによる研究も検討し始めている。

1。通过气管内给药培养的肺泡II型上皮细胞动力学 - 单独的II型肺泡II型上皮细胞与大鼠肺并在细菌学中培养它们一天，以防止细胞粘在培养皿中。为了维持细胞功能，使用实验室技术将恩格布雷斯 - 霍尔姆 - 霍尔姆 - 肿瘤（EHS）肿瘤外基质浸入培养基中，然后用4-二氨基-2-苯基吲哚（DAPL）染色细胞核，然后再摄取其他大鼠肺。几天后，将大鼠肺冷冻并固定，制备冷冻切片，并在荧光显微镜下观察，并在荧光显微镜下观察，并且细胞施用形成的肿块并附着在肺泡壁上，表明活细胞在形态上比以前的方法更活跃。由于DAPL需要冷冻切除，因此使用亲脂性拨钉核氰（DIL或DID）对培养的细胞进行染色，并用多聚甲醛固定组织并观察。已经确认可以区分施用的细胞和组织细胞。用KGF刺激培养的细胞，KGF是一种肺泡上皮细胞生长因子，持续12小时，用DAPL或DIL染色，并在气管内给药以寻找其动力学，并获得了相似的结果。由于细胞损伤略有损伤，因此无染色的培养细胞会在气管内给药，并使用组织学和电子显微镜搜索肺的给药。 2. Changes in cell morphology in the lungs of respiratory failure - Rats damaged by endotoxin, bleomycin, and hydrochloric acid were prepared, and cultured alveolar type II epithelial cells stimulated with KGF were administered intratracheally to the lungs of respiratory failure animals, and the dynamics of the cells administered are searched, but perhaps because of strong pulmonary edema, it has not reached the牙槽壁和很少的细胞粘附了。为了搜索最佳的给药时间，我们观察到随着时间的推移而变化，但是发现更多附着的细胞被发现在4到7天左右。由于该疾病的进展，还观察到粘附细胞的脱落。 3。通过将KGF刺激的培养的肺泡上皮细胞与人造表面活性剂相结合的抑制肺损伤的影响 - 当肺损伤后早点施用人造表面活性剂并随后施用培养细胞时，观察到辅助细胞的增加，并希望促进损害的修复，并且搜索正在进行中。 4。未来的前景 - 在产生肺部损伤后使用人工呼吸道管理来进行KGF刺激的培养细胞（抑制早期肺水肿）进行研究。此外，我们开始使用腺病毒的基因转移研究研究。