補助刺激分子の構造生物学的研究

共刺激分子的结构生物学研究

基本信息

批准号：
15019090
负责人：
池水信二
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ナイーブT細胞の成熟には、主要組織適合抗原(MHC)/T細胞受容体(TCR)複合体を介した抗原特異的なシグナルとB7/CD28複合体を介した補助刺激と呼ばれる抗原非特異的なシグナルの両方が必要である。我々は、前者のシグナル関わる分子として、MHCクラス2(Nature Immunology,2002),LFA-3(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1999)の構造解析を行った。また後者の補助刺激の構造を基にした知見を得るため、B7-1細胞外ドメインの構造(Immunity,2000)、及びB7-1/CTLA-4複合体の結晶構造(Nature,2001)を明らかにした。これらの分子は、T細胞と抗原提示細胞の接触領域に局在化し、細胞間の距離が140〜150Aの領域を形成する。この領域に局在化する蛋白質、及びIL-2/IL-2受容体(R)複合体及びIL-15/IL-15R複合体の構造解析を計画した。補助刺激分子の1つであるラット(r)CD48をLec3.2.8.1細胞により発現させて精製し、結晶構造解析を行った。rCD48と構造が既知であったrCD2の構造を基に、複合体のモデルを作成した。現在、論文の投稿準備中である。また、IL-15及びIL-15Rのα鎖の発現系を大腸菌を用いて作成した。これらの蛋白質は、His-tag修飾しているため、Niカラムを用いて初期精製を行った。Niカラムによる精製後の蛋白質は不純物を含むため、さらなる精製法の確立中である。さらに、T細胞と抗原提示細胞間の分子認識機構について、Nature Immunologyに総説を執筆した。

初始 T 细胞成熟涉及通过主要组织相容性抗原 (MHC)/T 细胞受体 (TCR) 复合物发出的抗原特异性信号和通过 B7/CD28 复合物发出的称为共刺激的抗原非特异性信号。我们对 MHC 2 类（Nature Nutrition，2002）和 LFA-3（Proc. Natl. Acad. Sci. USA，1999）作为参与前一信号的分子进行了结构分析。为了获得基于后者共刺激结构的知识，我们揭示了B7-1胞外结构域的结构（Immunity，2000）和B7-1/CTLA-4复合物的晶体结构（Nature，2001）。我做到了。这些分子定位于T细胞和抗原呈递细胞的接触区域，形成细胞间距离为140-150 A的区域。我们计划分析该区域的蛋白质结构，以及 IL-2/IL-2 受体 (R) 复合物和 IL-15/IL-15R 复合物。共刺激分子之一的大鼠(r)CD48在Lec3.2.8.1细胞中表达和纯化，并分析其晶体结构。该复合物的模型是根据 rCD48 和 rCD2 的结构创建的，rCD48 和 rCD2 的结构是已知的。该论文目前正在准备提交。此外，使用大肠杆菌创建了IL-15和IL-15R的α链表达系统。由于这些蛋白质经过 His 标签修饰，因此使用 Ni 柱进行初步纯化。由于使用Ni柱纯化后的蛋白质含有杂质，目前正在建立进一步的纯化方法。此外，他还在《自然免疫学》上撰写了一篇关于T细胞和抗原呈递细胞之间的分子识别机制的综述文章。