色素性乾皮症原因遺伝子産物によるゲノム損傷認識とその制御機構

着色性干皮病致病基因产物对基因组损伤的识别及其控制机制

• 批准号: 20012032
• 负责人: 菅澤 薫
• 金额: $ 5.95万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20012032/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 色素性乾皮症; UV-DDB; アセチル化

精製したヒストンアセチル化酵素(HAT) CBP/p300がUV-DDBと相互作用し、DDB2をアセチル化することを昨年度までに明らかにした。このDDB2の修飾部位を質量分析によって解析したところ、少なくともin vitroにおいてはN末端の40アミノ酸を含む領域に存在する7か所のリジン残基がアセチル化の標的となる可能性が示唆された。そこでヒト正常線維芽細胞WI38 VA13を親株として、このN末端領域を欠失した変異DDB2を安定に過剰発現する形質転換細胞株を樹立した。野生型DDB2の過剰発現により細胞の紫外線抵抗性が顕著に増強されたのに対して、N末端欠失DDB2を過剰発現する細胞株ではこの効果が明らかに減弱していた。一方、野生型DDB2は細胞の紫外線照射に伴ってCUL4リガーゼによるユビキチン化、およびプロテアソームによる分解を受けることが知られているが、N末端欠失DDB2は紫外線照射に応答した分解を受けにくいことが示された。以上の結果より、アセチル化部位として同定されたDDB2のN末端領域がユビキチン化の標的にもなっており、両者が共通のリジン残基を競合する可能性があること、またこの領域がDDB2タンパク質の安定性や細胞の紫外線感受性の制御において重要な役割を果たしている可能性が示唆された。現在、N末端欠失DDB2を含むUV-DDBを組換えタンパク質として精製し、in vitroでユビキチン化の基質となるかどうかを検討すると共に、7か所のリジン残基を非アセチル化体(アルギニン)、あるいはアセチル化模倣体(グルタミン)で置換した変異DDB2を作成し、その機能解析を進めている。

去年揭示了纯化的组蛋白乙酰酶（HAT）CBP/P300与UV-DDB和乙酰酸DDB2相互作用。通过质谱法对DDB2中这种修饰位点的分析表明，至少在体外，可能针对乙酰化，该区域中存在七个含有40个氨基酸的赖氨酸残基。因此，使用人正常成纤维细胞WI38 VA13作为亲本菌株，建立了转化后的细胞系，该细胞系稳定地过表达了已删除N末端区域的突变体DDB2。野生型DDB2的过表达显着增强了细胞紫外线的耐药性，而过表达N末端缺失的细胞系显然减弱了。另一方面，已知野生型DDB2会通过CUL4连接酶泛素化，并在细胞的紫外线照射后通过蛋白酶体降解，但是N端删除DDB2已显示出对紫外线辐射的反应而降低降解的可能性较小。以上结果表明，被识别为乙酰化位点的DDB2的N末端区域也是泛素化的靶标，并且两者可能竞争常见的赖氨酸残基，并且该区域可能在调节DDB2蛋白和细胞紫外线敏感性的稳定性中起重要作用。目前，含有N端缺失DDB2的UV-DDB已被纯化为重组蛋白，并且正在研究它是否会成为体外泛素化的底物，并且突变的DDB2且突变的DDB2将七个赖氨酸残基替换为非乙酰化形式（精氨酸）或乙酰化的含有乙酰化的Mimine（glutamine and and care）。

项目成果

色素性乾皮症遺伝子産物によるDNA損傷認識機構

着色性干皮病基因产物的DNA损伤识别机制

• 发表时间: 2009
• 期刊: 医学のあゆみ 228
• 作者: 門間聰之;豊田彩乃;奈良洋希;逢坂哲彌;菅澤薫
• 通讯作者: 菅澤薫

ヌクレオチド除去修復におけるDNA損傷認識の分子機序

核苷酸切除修复中DNA损伤识别的分子机制

• 发表时间: 2008
• 作者: T. Nakamura;S. Meshitsuka;S. Kitagawa;N. Abe;J. Yamada;T. Ishino;H. Nakano;T. Tsuzuki;T. Doi;Y. Kobayashi;S. Fujii;M. Sekiguchi vY. Yamagata;高城順一，金子哲，S. Sijia，高井和之，木口学，榎敏明，山田健郎，畠賢治，石井孝文，京谷隆;T.Irifune;Jun Akimitsu;菅澤薫
• 通讯作者: 菅澤薫

ヌクレオチド除去におけるTFIHヘリカーゼ活性調節機構の解析

核苷酸去除过程中TFIH解旋酶活性调控机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 赤木純一;菅澤薫
• 通讯作者: 菅澤薫

Molecular basis for DNA damage recognition in nucleotide excision repair.

核苷酸切除修复中 DNA 损伤识别的分子基础。

• 发表时间: 2009
• 作者: Sugasawa;K.
• 通讯作者: K.

Centrin 2 enhances in vitro nucleotide excision repair via complex formation with xeroderma pigmentosum group C pretein through its C-terminal domain

Centrin 2 通过其 C 末端结构域与着色性干皮病 C 组蛋白形成复合物，增强体外核苷酸切除修复

• 发表时间: 2008
• 作者: Nishi;R.;et.al.
• 通讯作者: et.al.