色素性乾皮症原因遺伝子産物によるゲノム損傷認識とその制御機構

着色性干皮病致病基因产物对基因组损伤的识别及其控制机制

• 批准号: 18012050
• 负责人: 菅澤 薫
• 金额: $ 7.04万
• 依托单位: Kobe University (2007)The Institute of Physical and Chemical Research (2006)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18012050/
• 关键词: ヌクレオチド除く去修復; 色素性乾皮症; DNA損傷認識; 突然変異; XPC; XPE; 皮膚癌; ヌクレオチド除去修復; DDB2

ヌクレオチド除去修復(NER)のDNA損傷認識に必須であるXPCタンパク質にGFPを融合したものを安定に発現するヒト細胞株を作成し、FRAP(fluorescence recovery after photobleaching)法によりXPCの細胞内動態の制御を詳細に解析した。その結果、細胞の紫外線照射に伴ってXPCのDNA損傷への結合を反映してmobilityが低下すること、またこのmobilityの低下が紫外線量の変化に対して二相性を示すことがわかった。DDB2の過剰発現、およびsiRNAを用いた発現抑制の結果から、比較的低線量で見られるXPCのmobility低下がUV-DDBに依存することが示された。これは、DNA結合活性を喪失したXP-C群患者由来の変異XPC(W690S)がUV-DDB依存的に紫外線損傷部位にリクルートされうることを示した昨年度の結果とあわせ、UV-DDB(XPE)とXPCが協調して紫外線損傷の効率的な認識・修復、さらには皮膚がんの抑制にあたっていることをin vivoで証明するものである。さらにNERの過程でXPCよりも後の段階で働く因子について同様にFRAPによる解析を行ったところ、XPAが修復複合体に取り込まれる以前の段階で従来知られていなかったNERの制御機構が存在することが強く示唆された。この他、いくつかのXP-C群細胞株についてXPC遺伝子の変異をゲノムレベルで同定した。特に日本国内の患者について、欧米では報告されていない新たなタイプの変異が見出された。一方、DDB2については従来知られていたユビキチン化に加えて新たな翻訳後修飾の存在を示す結果が得られた。現在、この修飾部位の同定、および変異体の作成を進めている。

人类细胞系稳定地表达了与XPC蛋白的GFP融合，对于核苷酸切除修复期间的DNA损伤识别至关重要，并使用FRAP（光刷后的荧光恢复）详细分析了XPC细胞内动力学的调节。结果，发现迁移率降低，反映出XPC由于暴露于紫外线的细胞而与DNA损伤的结合，并且这种迁移率的降低是双相对紫外线射线剂量变化的变化。 DDB2的过表达和使用siRNA的表达抑制表明，在相对较低剂量下看到的XPC的迁移率降低是UV-DDB依赖性的。 This demonstrates in vivo that in conjunction with the results from last year, which showed that mutant XPC (W690S) from patients with XP-C group who have lost their DNA-binding activity can be recruited to sites of UV-DDB in a UV-DDB-dependent manner, UV-DDB and XPC are working together to efficiently recognize and repair UV-ray damage, as well as suppress skin cancer.此外，使用FRAP进行了对NER过程后期作用的因子的类似分析，该因素是使用FRAP进行的，FRAP强烈建议在将XPA纳入维修复合物中之前的舞台上有一种先前未知的调节机制。另外，在几种XP-C组细胞系的基因组水平上鉴定了XPC基因中的突变。特别是，在日本境内的患者中发现了新型突变，西方尚未报告。另一方面，结果表明，除了先前已知的泛素化外，还存在新的翻译后修饰。目前，我们正在开发此修改网站并创建突变体。

项目成果

Sensing of DNA damage by XPC/Rad4: one protein for many lesions.

XPC/Rad4 检测 DNA 损伤：一种蛋白质可检测多种病变。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nat. Struct. Mol. Biol. 14
• 作者: Sugasawa;K;and Hanaoka;F.
• 通讯作者: F.

紫外線による遺伝子損傷の修復メカニズム

紫外线引起的基因损伤的修复机制

• 发表时间: 2006
• 期刊: 生化学 78
• 作者: 菅澤 薫;花岡文雄
• 通讯作者: 花岡文雄

Molecular mechanism of nucleotide excision repair as a defense against cancer.

核苷酸切除修复防御癌症的分子机制。

• 发表时间: 2007
• 作者: Sugasawa;K.
• 通讯作者: K.

ヌクレオチド除去修復におけるSUMO化の役割

SUMO化在核苷酸切除修复中的作用

• 发表时间: 2007
• 作者: 白川昌宏;ほか;菅澤 薫
• 通讯作者: 菅澤 薫

ヌクレオチド除去修復における損傷認識とュビキチン化

核苷酸切除修复中的损伤识别和泛素化

• 发表时间: 2007
• 作者: 菅澤 薫;ほか
• 通讯作者: ほか