色素性乾皮症原因遺伝子産物によるゲノム損傷認識とその制御機構

着色性干皮病致病基因产物对基因组损伤的识别及其控制机制

基本信息

批准号：
18012050
负责人：
菅澤薫
金额：
$ 7.04万
依托单位：
Kobe University (2007)The Institute of Physical and Chemical Research (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ヌクレオチド除去修復(NER)のDNA損傷認識に必須であるXPCタンパク質にGFPを融合したものを安定に発現するヒト細胞株を作成し、FRAP(fluorescence recovery after photobleaching)法によりXPCの細胞内動態の制御を詳細に解析した。その結果、細胞の紫外線照射に伴ってXPCのDNA損傷への結合を反映してmobilityが低下すること、またこのmobilityの低下が紫外線量の変化に対して二相性を示すことがわかった。DDB2の過剰発現、およびsiRNAを用いた発現抑制の結果から、比較的低線量で見られるXPCのmobility低下がUV-DDBに依存することが示された。これは、DNA結合活性を喪失したXP-C群患者由来の変異XPC(W690S)がUV-DDB依存的に紫外線損傷部位にリクルートされうることを示した昨年度の結果とあわせ、UV-DDB(XPE)とXPCが協調して紫外線損傷の効率的な認識・修復、さらには皮膚がんの抑制にあたっていることをin vivoで証明するものである。さらにNERの過程でXPCよりも後の段階で働く因子について同様にFRAPによる解析を行ったところ、XPAが修復複合体に取り込まれる以前の段階で従来知られていなかったNERの制御機構が存在することが強く示唆された。この他、いくつかのXP-C群細胞株についてXPC遺伝子の変異をゲノムレベルで同定した。特に日本国内の患者について、欧米では報告されていない新たなタイプの変異が見出された。一方、DDB2については従来知られていたユビキチン化に加えて新たな翻訳後修飾の存在を示す結果が得られた。現在、この修飾部位の同定、および変異体の作成を進めている。

我们创建了一种稳定表达与 XPC 蛋白融合的 GFP 的人类细胞系，这对于核苷酸切除修复 (NER) 中的 DNA 损伤识别至关重要，并使用 FRAP（光漂白后荧光恢复）方法控制 XPC 的细胞内动态。详细分析了。结果，我们发现，当细胞暴露于紫外线照射时，XPC 的迁移率降低，反映了其与 DNA 损伤的结合，并且这种迁移率的降低与紫外线辐射量的变化呈现出双相关系。 DDB2 过表达和使用 siRNA 表达抑制的结果表明，在相对低剂量下观察到的 XPC 迁移率降低取决于 UV-DDB。这与去年的结果相结合，显示来自 XP-C 组患者的失去 DNA 结合活性的突变 XPC (W690S) 可以以 UV-DDB 依赖性方式招募到 UV 损伤位点）和 XPC 一起发挥作用。有效识别和修复紫外线损伤，并在体内抑制皮肤癌。此外，对 NER 过程中比 XPC 更晚起作用的因素进行的类似 FRAP 分析表明，在 XPA 并入修复复合体之前的阶段存在以前未知的 NER 控制机制。此外，在几种 XP-C 组细胞系的基因组水平上鉴定出了 XPC 基因的突变。尤其是在日本患者身上发现了一种在欧洲和美国尚未报道过的新型突变。另一方面，对于DDB2，获得的结果表明除了先前已知的泛素化之外还存在新的翻译后修饰。我们目前正在识别这个修饰位点并创建突变体。