インターフェロン制御因子ファミリー活性化の時空間ダイナミクスの解析

干扰素调节因子家族激活的时空动态分析

基本信息

批准号：
18060008
负责人：
本田賢也
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Osaka University (2007)The University of Tokyo (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

9つあるlnterferon regutatory factor(IRF)ファミリーメンバーの内IRF3・IRF7は、細胞に侵入した病原体を認識し、活性化することでインターフェロンの産生に重要な役割を果たす。そのメカニズムは、病原体の特徴ある核酸構造と異常な細胞内局在を、Toll like receptor(TLR)や細胞内RNA認識受容体が認識し、IRF活性化へとシグナルを変換するためと考えられているが、病原体由来のDNAの認識メカニズムは、まだ十分には理解されていない。そこで、IRF3・IRF7の活性化を促す細胞内DNAセンサーの同定を試みた。IRF7を効果的に活性化できる細胞である形質細胞様樹状細胞からcDNAと、それがコードする蛋白質が結合した形のライブラリーを構築した(CFPDライブラリー)。このCFPDライブラリーをリガンド(非メチル化DNA)を結合させたカラムにアプライし、非メチル化DNAに特異的に結合する分子を解析したところ、いくつかの核酸結合ドメインを持つ分子が同定された。同定された分子は核小体周辺の核内に局在する分子であった。そこで、そのノックダウン細胞の樹立とノックアウトマウスの作製を試みた。現在までに、当該分子のノックダウン方法は確立でき、同時にノックアウトES細胞の作製は終了し、キメラマウスを作製できた。また一方、IRF3・IRF7のみならず、 IRF2およびIRF5の血球分化やTLRシグナルにおける役割をさらに詳細に検討した。IRF2が赤血球分化におけるアポトーシス抑制に必須であること、および、 IRF5が複数のTLRシグナルの協調作用において必須の作用があることを見いだし、論文として報告した。

在9个LNTerferon调节因子（IRF）家族成员IRF3和IRF7中，通过识别和激活已入侵细胞的病原体，在干扰素的产生中起着重要作用。该机制被认为是因为TOLL样受体（TLR）和细胞内RNA识别受体认识了病原体的独特核酸结构和异常的亚细胞定位，并将信号转化为IRF激活，但是对病原体衍生DNA的识别机制尚未完全理解。因此，我们试图鉴定刺激IRF3和IRF7激活的细胞内DNA传感器。构建了一个文库，其中cDNA和蛋白质编码的蛋白质与能够有效激活IRF7（CFPD库）的细胞结合。将此CFPD文库应用于与配体（非甲基化DNA）结合的柱，并分析了特异性结合与非甲基化DNA的分子，并鉴定了具有几个核酸结合结构域的分子。所鉴定的分子是将核核周围核内定位的分子。因此，我们试图建立敲除细胞并创建敲除小鼠。迄今为止，已经建立了一种敲除分子的方法，同时完成了基因敲除ES细胞的产生，从而导致产生嵌合小鼠。另一方面，我们更详细地研究了IRF3和IRF7的作用，以及IRF2和IRF5在血细胞分化和TLR信号中的作用。我们发现IRF2对于抑制红细胞分化的凋亡至关重要，并且IRF5对多个TLR信号的协调作用具有重要作用，并将其报告为论文。