染色体の均等分配におけるPlk1とAuroraキナーゼ群のクロストークの役割

Plk1 和 Aurora 激酶群之间的串扰在染色体均匀分布中的作用

基本信息

批准号：
18058026
负责人：
後藤英仁
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

染色体の複製・分配過程の調節には,状況に反応して特異的に活性化されるプロテインキナーゼが中心的な役割を果たしているが,各キナーゼ間の連関については不明な点も多い。これまでに,我々は,DNA障害、複製チェックポイントの中心分子であるChk1が,分裂期において,サイクリン依存性キナーゼ(Cdk)1によって、そのSer286およびSer301がリン酸化されることを報告してきた。今年度,Chk1のSer301に対する抗リン酸化(ペプチド)抗体を作製し,その解析を行った。その結果,このリン酸化反応は,分裂前期から中期にかけて引き起こされ,分裂後期以降は,減弱することが判明した。興味深いことに,核膜が崩壊するの分裂前期においては,このリン酸化反応は染色体凝縮が弱い(分裂前期の初期と思われる)時点では核内および核外で認められるにもかかわらず,染色体の凝縮が進むにつれて,主に,核外において強く認められようになることが判明した。そこで,より詳細にこのリン酸化反応の生理的意義を解析するため,Chk1野生型(WT)および2つのリン酸化部位をアラニンに置換したChk1変異体(S286A/s301A)をテトラサイクリン誘導性に発現するHeLa細胞を確立した。これらの細胞を用いて分裂前期における誘導性蛋白質の局在を調べたところ,WTは核内および核外に局在するにもかからず,S286A/S301Aはほとんど核内に局在することが判明した。また,S286A/S301Aは、WTに比べて,分裂期への進行が遅れることが判明した。以上の結果より,Cdk1によるChk1リン酸化反応は,Chk1の核外移行を通して,分裂期への進行過程を制御している可能性が高いと考えられる。

PRACAIN激酶通常是根据情况而被激活的，它在调整染色体的重复和分布过程中起着核心作用，但是每个激酶之间都有许多未知点。迄今为止，我们报道说，CHK1是DNA障碍和重复检查点的中央分子，在分区期间通过细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）1进行亚麻化。今年，制备并分析了CHK1 Ser301的抗氧化（肽）抗体。结果，磷酸化反应是由分裂的上半年到中间时期引起的，在分裂的后半部分后被发现削弱。有趣的是，在核膜分裂的上半年，尽管在核心染色体薄弱的情况下，尽管在细胞核和核之外得到了认识，但这种磷酸化反应（似乎在分裂的上半段开始）事实证明，随着凝结的发展，它在核之外得到了强烈认可。因此，为了更详细地分析该磷酸化的生理意义，CHK1野生型（WT）和两个磷酸化位点（S286A/S301A）在Tetra Cycllylin诱导中表达了两个磷酸化位点已经建立了细胞。使用这些细胞检查诱导的蛋白在分裂的第一阶段的定位，WT不在核武器和核外发生，而S286A/S301A大多位于核中。此外，已经发现S286A/S301A与WT相比，该分区期的进度延迟了。基于上述结果，CDK1 CHK1磷酸化反应很可能会控制分裂周期的进展，从而通过CHK1的OUT-核跃迁。