クロマチン構造変換の及ぶ領域を調節し局限化する機構

调节和定位受染色质结构变化影响的区域的机制

基本信息

批准号：
18055032
负责人：
石井浩二郎
金额：
$ 5.06万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18055032/
关键词：
クロマチン遺伝子染角体構造変換転写 RNAi 染色体構造変換

项目摘要

ヘテロクロマチン化は遺伝子転写に対して抑制的に働くクロマチン構造変換のひとつの典型であり、染色体形態を凝集型へと大きく変化させる。ヘテロクロマチン化反応は本質的に可逆的であるため、ヘテロクロマチン領域の成立にはクロマチン構造の確立と維持の二つの作用が必要とされる。一方ヘテロクロマチン領域は、ヌクレオソーム構造の共通性を分子基盤に近隣のクロマチン領域へと拡大していく潜在能力を持つ。分裂酵母ではそのようなヘテロクロマチン領域の形成もしくは拡大に細胞性のRNAi装置が必要なことが判明しており、拡散能力を備えたRNAi装置がヘテロクロマチン構造変換の及ぶ領域の局限化に機能していると考えられる。これまで、セントロメアヘテロクロマチン領域に由来するノンコーディングRNAがsiRNAに変換される過程の分子レベルでの解析を継続して行ってきた。本年度はそれら内在性のノンコーディングRNAに共通する配列要素SIREに結合するタンパク質因子の探索を行った。核抽出液を用いたゲルシフトアッセイによって、SIREや類似配列RNAに対するバンドシフトが得られ、分裂酵母のタンパク質精製をすすめることによって、その少なくとも一部は細胞性RNAi装置のエフェクター複合体であるRITSによって生み出されていることが判明した。SIRE類似RNAへの結合は、RITSの必須コンポーネントであるago1の変異株に加え、細胞内のsiRNA生成が不能なdcr1やrdp1など他のRNAi装置変異株から精製したRITSでは失われ、siRNAとの塩基配列依存的な結合を検出していると考えられる。その特異性に関する解析はさらに深められている。

异染色性化是染色质结构转化率的典型例子，该转化率对基因转录作用，并显着将染色体形态变成聚集。由于异染色性反应本质上是可逆的，因此异染色质区域的建立需要两种动作：建立和维护染色质结构。另一方面，杂染色质区域有可能根据分子基础将核小体结构的共同点扩展到附近的染色质区域。已经发现，在裂变酵母中形成或扩展这种异染色质区域需要细胞RNAi设备，并且人们认为具有扩散能力的RNAi器件在受异染色质结构转换的位置区域中具有扩散能力的功能。到目前为止，我们一直在分析从丝粒异染色质区域衍生成siRNA的非编码RNA的分子水平的过程。今年，我们搜索了结合序列元件父亲的蛋白质因子，这对于这些内源性非编码RNA是常见的。使用核提取物的凝胶转移测定导致带向父和相似序列RNA，并通过促进裂变酵母的蛋白质纯化，发现其中至少一部分是由RITS产生的，Rits是细胞RNAi设备的效应子络合物。在从其他RNAi设备突变体（例如DCR1和RDP1）纯化的RIT中丢失了与Sire样RNA的结合，例如DCR1和RDP1，这些突变体是RITS的必不可少的组成部分，以及AGO1的突变体，也无法在细胞中产生siRNA，并且被认为可以检测核苷酸序列序列依赖于siRNA。对其特异性的分析进一步加深。