反復DNAのクロマチン構築に関与するRNA小分子の研究

参与重复DNA染色质组装的小RNA分子的研究

基本信息

批准号：
17770149
负责人：
石井浩二郎
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年までの解析により、分裂酵母セントロメアヘテロクロマチンの反復DNA領域から産出されているsiRNAは、その前駆体RNAにSIREという共通配列を有し、SIREが細胞内RNAi機構によるsiRNA産生に積極的に可能性が提示されていた。本年度はそのsiRNA産生誘導の分子機構の解明を試みた。まず、SIREによる前駆体RNAのsiRNA代謝はSIREの上流部分のRNAに限定されることをより詳細に示した。次に、SIREによるsiRNA産生の特異性を調べる目的で他のセントロメアDNA由来siRNAの鋳型配列との活性比較を行い、SIRE以外のsiRNA鋳型配列にも異所的なsiRNAを誘導する能力があることを示した。その活性は、容易に誘導siRNAが検出できる1000塩基前後の長さを用いた場合には両者とも同等の力価を示したが、セントロメア反復DNAに見られる本来の長さである376塩基での活性を測定したところ、力価自体は明らかに下がるが両者の能力の間に明確な違いがあることを、二つの異なるコンストラクト条件下で同様に検出した。SIREは特異的に新規siRNAを自律的に誘導する能力があるようであり、SIREに依存した一次的siRNA新規合成とその産物を利用してさらに増幅につなげるSIRE非特異的な二次的siRNA合成の2種類の機構の組み合わせで、分裂酵母セントロメア反復DNAに由来するde novoのsiRNA合成は行われていると考えられる。そのような反応にはRNA依存型RNAポリメラーゼの働きが不可欠であるが、実際にSIREに特異的に起こるRNAを鋳型にした微弱なRNA転写反応をin vivoで検出することに成功している。また、セントロメアヘテロクロマチン構造が不完全な状況でSIREを含むRNAの転写は内在性siRNAの産生に阻害的に働くことも発見した。そのような条件下ではSIREによる限定因子の競合が起きていると考えられる。

由于对去年的分析，siRNA是由分裂酵母中心透粒染色质的重复DNA区域产生的，在其前体RNA中具有称为SIRE的公共阵列，并且在细胞内RNAI机制中积极实现SIRNA被提出。今年，我们试图阐明siRNA生产指南的分子机制。首先，RNA siRNA代谢的父亲前奏更详细地限制在父亲上部的RNA。接下来，为了检查siRNA的父亲产生的特异性，我们具有将活性与其他丝粒DNA衍生的siRNA衍生的siRNA衍生的序列进行比较，并且具有诱导siRNA的能力，而siRNA是contratical siRNA序列的其他比父亲显示。当可以轻松检测到约1000个碱基的长度时，活动的功率都相同，但是在Centromere重复的DNA中发现的原始长度为376个基础。在两个不同的构造条件下，两者的能力之间的能力之间存在明显的差异。父亲似乎具有诱导新的siRNA单位的能力，而父亲标称的次级siRNA合成可以使用依赖父亲的主要sirna组成和产物进一步扩增。重复的DNA在两种类型的机制的组合中进行。 RNA依赖性RNA聚合酶的作用对于此类反应是必不可少的，但是它成功地检测了实际形成的RNA的弱RNA转录反应，该反应实际上形成了RNA，实际上与体内特有的是SIRE。此外，还发现包括父亲在内的RNA转移在内部siRNA的生产中起作用，在不完整的情况下，共有丝粒杂环结构。在这种情况下，人们认为正在与父亲发生有限的因素冲突。