細菌2成分性膜孔形成毒素の「超チャネル」の構造と形成機構

细菌双组分成孔毒素“超级通道”的结构及形成机制

基本信息

批准号：
18054003
负责人：
神尾好是
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Shokei Gakuin College (2007)Tohoku Gakuin University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1. ヒト多型核白血球膜の不溶性膜画分(DRM)、ラフト上における黄色ブドウ球菌のロイコシジン膜孔オリゴマーの形成:黄色ブドウ球菌のロイコシジン(Luk)はLukSとLukFの2成分が共同してヒト多型核白血球(HPMNL)、単球、マクロファージなどを崩壊する。HPMNLにLukSを単独で作用させると、24%がラフト上に存在し、2成分を作用させた場合には膜に結合した毒素成分の90%がリング状複合体としてラフトに存在した。一方LukFは単独ではラフトには存在しなかった。10mMメチルβサイクロデキストリン処理によりLukのラフトへの集合が阻害され、崩壊活性は示さなかった。これらの結果からLukの2成分がヒト多型核白血球膜上の不溶性膜画分(DRM)ラフト上で膜孔オリゴマーを形成することを明らかにした。2. 標的細胞膜ラフト上において膜孔の形成並びに膜孔クラスター化を実証した。すなわちCa^<++>包埋ラフトリポソームとメルカプトエタノール存在下でのみステムを形成するプレステムヘテロ7量変異中間体及びローダミン(Rod2)と反応させ、蛍光顕微鏡下でプレステムの本中間体Capドメインからの切り離しタイミングの可視化に成功した。さらに本リポソーム上における膜孔のクラスター化を「一分子測定技術」で可視化に成功した。3. 膜結合型プロテインキナーゼの発見、及びリン酸化シグナル伝達系の解析: 界面活性剤NP-40で可溶化した白血球膜からラフトリポソームを調製し、本リポソームにLukS、LukF、ATPを添加した結果、LukS上におけるリン酸化反応が起きることを明らかにした。

1. 在人多形核白细胞膜的不溶性膜组分（DRM）和筏上形成金黄色葡萄球菌杀白细胞素膜孔寡聚体：金黄色葡萄球菌的杀白细胞素（Luk）是由两种成分LukS和LukF协同作用产生的，破坏人多形核白细胞。白细胞 (HPMNL)、单核细胞、巨噬细胞等当LukS单独应用于HPMNL时，24%存在于筏上，而当应用两种成分时，90%的膜结合毒素成分以环形复合物形式存在于筏上。另一方面，木筏中并不只有 LukF 一人。用 10mM 甲基 β-环糊精处理抑制 Luk 组装成筏，并且没有显示任何崩解活性。这些结果表明，Luk 的两种成分在人多形核白细胞膜上的不溶性膜组分 (DRM) 筏上形成膜孔寡聚体。 2.我们展示了靶细胞膜筏上的膜孔形成和膜孔聚集。换句话说，我们与嵌入 Ca^++> 的筏脂质体和仅在巯基乙醇和罗丹明存在下形成茎的前茎异七价突变体中间体（Rod2）反应，并且在荧光显微镜下，我们检测到了中间体 Cap我们成功地可视化了断开连接的时间。此外，我们利用“单分子测量技术”成功地可视化了该脂质体上膜孔的聚集。 3.膜结合蛋白激酶的发现和磷酸化信号转导系统的分析：用表面活性剂NP-40溶解白细胞膜制备筏脂质体，并向脂质体中添加LukS、LukF和ATP，结果表明发生了磷酸化反应。在卢克S上。