樹状突起スパインへの選択的蛋白集積メカニズムに関する研究

树突棘选择性蛋白质积累机制研究

基本信息

批准号：
18021004
负责人：
白尾智明
金额：
$ 4.61万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

樹状突起スパインの蛋白組成はシャフト部とは大きく異なっており、スパインは独特な選択的蛋白集積機構を持つと考えられる。我々はこれまでの研究で、神経細胞特異的アクチン結合蛋白ドレブリンAのシナプス後部への集積がアクチンフィラメント、Homer、PSD-95等のスパイン機能に重要な分子の集積を促進するばかりでなく、NMDA受容体集積の恒常性維持的可塑性に必要なことを示した。本研究では、これらの現象に関わる分子の全体像を解明するために、yeast two hybridシステムを用いてドレブリン結合蛋白の探索を行った。平成19年度の研究で、ドレブリンA分子のN末端には、既知のリン酸化酵素および新規蛋白スパイカー結合することが判った。リン酸化酵素に関しては、myc標識リン酸化酵素とHA標識ドレブリンAを線維芽細胞および初代培養神経細胞に発現させると共局在した。また、抗体用いて神経細胞を二重染色するとスパインでの共局在像が得られた。さらに、myc標識リン酸化酵素とHA標識ドレブリンAを線維芽細胞に共発現させてから、その抽出液をHA抗体で免疫沈降すると、myc標識リン酸化酵素が共沈した。以上より、ドレブリンAと当該リン酸化酵素はスパインで直接結合していることがわかり、スパインでのカルシウム依存的細胞骨格構築変化メカニズムの一端をになう可能性が示唆された。一方、新規蛋白スパイカーに関しては、(1)スパイカーの核外における分布はドレブリン依存的である。(2)スパイカーはドレブリン非依存性のスパイン局在配列を持つ。(3)スパイカーは核移行シグナル(NLS)と核外移行シグナル(NES)を持つ。(4)スパイカーをノックダウンするとスパイン密度が減少することが示唆された。

树突状突出脊柱的蛋白质组成与轴部分非常不同，并且认为脊柱具有独特的选择性蛋白质整合机制。在先前的研究中，我们不仅积累了对于肌动蛋白丝，荷马，PSD-95的脊柱功能很重要的分子的积累，因为神经细胞特异性肌动蛋白组合蛋白甲状腺异丁质A在后部表明它表明它表明它的表现。对于受体积累的房屋可塑性是必需的。在这项研究中，为了阐明这些现象所涉及的分子的全部图像，搜索了酵母两种杂种系统的脱粒 - 培养基结合蛋白。 2007年的一项研究表明，多酰胺A分子的N末端将是已知的磷酸化酶和一种新的蛋白尖峰。至于磷酸化的酶，在成纤维细胞和第一代培养神经细胞中表达MYC标志磷酸化酶和HA标志Drabrin A。此外，使用抗体的双染神经细胞在脊柱中获得了关节雕像。此外，当将MYC标志磷酸化的酶和HA标志Drabrin A控制为纤维纤维时，提取物用HA抗体进行了免疫，而MYC标志的磷酸化酶沉没了。从上面可以发现，drovulin a和磷酸化酶直接粘在脊柱中，这表明脊柱中钙依赖性细胞骨架的一部分可能有可能。另一方面，关于新的蛋白质尖刺者，（1）尖刺核外的分布是依赖于德雷林的。（2）尖刺的脊柱局部局部序列是甲虫的非依赖性。（3）尖刺的核转变信号（NLS）和核转变信号（NES）。（4）建议击倒尖刺会降低脊柱密度。