新規蛋白スパイカーによるスパイン形成制御機構の解明

使用新型蛋白质尖峰阐明脊柱形成控制机制

基本信息

批准号：
20021002
负责人：
白尾智明
金额：
$ 4.86万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

樹状突起スパインを構成する蛋白群がどのようにしてスパインへ選択的に集積するかは、スパイン機能を解明する上で非常に重要である。本研究では、ドレブリンに結合する新規蛋白スパイカーのスパイン形成に関する機能を明らかにした。Spikarは非神経細胞では主に核のみに存在するが、神経細胞では細胞質特に樹状突起スパインに強く局在している。非神経細胞におけるSpikarとドレブリンの共発現実験により、Spiakrが細胞質に出現するためには、ドレブリンと結合していることが必要であることが示唆された。次に、神経細胞でのSpikarの機能を探るため、Spikarの発現亢進および抑制実験を行った。まず、Spikarの核移行シグナルにミューテーションを導入したところ、核内への移行が阻止されたことより、この部位が核移行シグナルであると結論されたので、核移行シグナルにミューテーションを入れる事により細胞質のみに存在する性質を有するようになったSpikar変異体mNLS-Spikarを作成し、このコンストラクトを培養8日の神経細胞に発現させ、約1週間後にスパイン数を測定したところスパイン数が有意に増加していた。次に、RNAiを用いてSpikarの発現抑制を行った。培養3日後からSpikarの発現を抑制した神経細胞で約2週間後に解析したところ、フィロポディアおよびスパイン数とmEPSC頻度が有意に減少していた。しかし、mEPSCのアンプリチュードやスパイン内へのドレブリンの集積度には変化がないことが示唆された。したがって、Spikarはシナプス誘導には関与するが、一端できあがったシナプスの維持には関与しないことが示唆された。以上より、Spikarは核では転写調節因子として働き、核外(細胞質)ではシナプス形成誘導に関与している新規蛋白であると考えられた。

阐明脊柱功能如何在脊柱中选择性地积累了脊柱功能。这项研究揭示了与形成新蛋白尖刺与多丁胺结合的功能。 Spikar仅在核武器的非宗教神经细胞中发现，但在细胞质中，尤其是在细胞质细胞中。 Spikar和Dorbrine在非神经细胞中的CO存在现实表明，必须将Spiakr粘在Dreblin上才能出现在细胞质中。接下来，进行了Spikar的增加，并进行了抑制实验，以探索神经细胞中的Spikar功能。首先，当将静音引入Spikar核转变信号时，得出的结论是，该部分是核转变信号，而不是停止向核的转移，因此将静音放在核转变信号中。它仅在细胞质中具有该特性，以在培养物的第8个中表达该构建体，并在一个星期后测量脊柱的数量。接下来，使用RNAi抑制了Spikar的表达。大约两周后，分析了分析的神经细胞，这些神经细胞在三天后抑制了Spikar的表达，并且细胞增多症和脊柱和MEPSC的频率显着降低。但是，有人建议MEPSC扩增和脊柱中的洁粒盐水没有变化。因此，有人建议Spikar参与Sinapse指导，但不参与保持一端。从以上，Spikar被认为是一种新蛋白质，可作为核武器的转录控制因子，并参与核（细胞质）突触形成的诱导。