ヒト動原体タンパク質Mis12複合体の異常とがん化

人类着丝粒蛋白 Mis12 复合体异常与癌变

• 批准号: 17013047
• 负责人: 小布施 力史
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17013047/
• 关键词: がん; 染色体; プロテオーム; 染色体分配; タンパク質; 動原体; ヘテロクロマチン

申請者は、最近ヒトの動原体タンパク質Mis12複合体を精製し、構成因子の同定に成功した。その中には低分化度の腫瘍で高発現していることが知られているHEC1/KNTC2およびAF15q14が含まれていた。本課題は、ヒトMis12複合体の構成因子の機能発現異常とがん細胞の形質の変化との共役についてアプローチすることを目的とした。本年度は、Mis12結合因子として同定したHEC1およびAF15q14を含む11種類について、cDNAクローン、一過的な発現系、RNAiによる機能阻害系、抗体など、ほとんどの材料をそろえることができた。これに加えて、2ハイブリッド法のプラスミド構築をおこない、11種類のタンパク質の結合のパートナーを検証することにより、Mis12複合体の複合体の分子的な構築像が明らかになってきた。その結果、Mis12は基本的に、DC8,PMF1,c20orf172とともに複合体を形成することが明らかとなった。タイムラプスムービーによる解析により、これらの因子はMis12と全く同じ挙動を示し、特にM期に動原体に多くの分子が局在することが明らかとなった。また、これらの因子のRNAiによる機能阻害は、染色体分離に異常な表現形を引き起こすことも明らかになった。Mis12複合体とHP1との相互作用は、HP1のクロモシャドウドメインを介していること、その相互作用はM期に弱くなることがわかった。これとは逆にCENP-CがM期特異的にMis12複合体と相互作用することが明らかとなった。これらのことは、何らかのM期特異的な修飾による機能複合体形成の制御の存在を示唆するものと思われる。今年度の助成により、Mis12の構成因子はすべて動原体における機能因子であることが判明し、これらの発現異常が染色体の不安定性を引き起こすことが示唆された。また、Mis12構成因子の抗体、cDNAをそろえることができたので、今後、M期特異的なリン酸化酵素による複合体構築との関連や実際のがん組織での動態など、ヒトMis12複合体とがん細胞の形質の変化との共役についてより直接的なアプローチが可能な準備が整ったものと考える。

申请人最近纯化了人类丝粒蛋白MIS12复合物，并成功地识别了成分因素。其中包括HEC1/KNTC2和AF15Q14，已知在低差异肿瘤中高度表达。这个目标是接近人类MIS12复合物的组成因子异常功能表达，随着癌细胞性状的变化。今年，我们能够收集11种类型的大多数材料，包括HEC1和AF15Q14，这些材料被确定为MIS12结合因子，包括cDNA克隆，瞬态表达系统，RNAI抑制系统和抗体。此外，通过使用两种杂交方法进行质粒构建并验证11种蛋白质的结合伴侣，已经揭示了MIS12复合物的分子结构。结果，发现MIS12基本上与DC8，PMF1和C20ORF172形成了复合物。使用延时电影的分析表明，这些因素的行为与MIS12完全相同，并且许多分子位于丝粒体中，尤其是在M期。还表明，RNAi对这些因子的抑制会导致染色体分离中异常表型。发现MIS12复合物与HP1之间的相互作用是通过HP1的Chromoshadow结构域介导的，并且在M期间相互作用削弱。相反，可以揭示CENP-C以M阶段的特定方式与MIS12复合物相互作用。这些似乎暗示了通过某些M相特定修饰的功能复合物形成的调节。今年的赠款表明，MIS12的所有组成因素都是丝粒体中的功能因素，这表明这些异常表达会导致染色体不稳定性。此外，由于我们已经能够组织MIS12成分的抗体和cDNA，因此我们相信我们准备在将来准备准备，以提供更直接的方法来在人类MIS12复合物与癌细胞的变化之间进行更直接的结合方法，例如它与M-phase特异性复合物及其在实际癌症组织中的动力学相关性。

项目成果

Two E3 ubiquitin ligases, SCF-Skp2 and DDB1-Cu14, target human Cdt1 for proteolysis

两种 E3 泛素连接酶 SCF-Skp2 和 DDB1-Cu14，靶向人 Cdt1 进行蛋白水解

• 发表时间: 2006
• 期刊: EMBO J. (in press)
• 作者: H.Nishitani1;N.Sugimoto;V.Roukos;Y.Nakanishi;M.Saijo;C.Obuse;T.Tsurimoto;K.I.Nakayama;K.Nakayama;M.Fujita;Z.Lygerou;T.Nishimoto
• 通讯作者: T.Nishimoto

Comprehensive analysis of the Interphase Centromere Complex components enriched in the CENP-A chromatin of human cells

人类细胞CENP-A染色质中富集的间期着丝粒复合体成分的综合分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: Genes Cells (in press)
• 作者: M.Ikenol;H.Izuta;N.Suzukil;H.Yang;T.Tomonaga;N.Nozaki;C.Obuse;Y.Kisu;NGoshima;N.Nomura;K.Yoda
• 通讯作者: K.Yoda