ヒト細胞におけるM期から複製開始にいたるまでの染色体構成因子のプロテオーム解析

人类细胞从 M 期到复制起始的染色体组成因子的蛋白质组分析

• 批准号: 17050012
• 负责人: 小布施 力史
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: Hokkaido University (2006)Kyoto University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17050012/
• 关键词: プロテオーム; 染色体; 質量分析; インフォマティクス; ヘテロクロマチン; 定量プロテオミクス; クロマチン; 細胞周期; 核; インフォマティックス

M期から複製開始にいたるまでの時期は、分配された染色体が説凝縮し核膜が再構成されていくというダイナミックなプロセスが観察されるのみならず、次の細胞周期に進行するか否かのデシジョン、それに伴う複製開始複合体の形成など、細胞核の構造と機能に直結した課題が凝縮されている。本課題は、ヒト染色体の姉妹染色体の分配時期から複製開始にいたるまでの染色体構成因子の量的な変動を、質量分析をもちいたプロテオーム解析により網羅的に明らかすることを目的としている。これまでに、非イオン性界面活性剤処理、マイクロコッカルヌクレアーゼ処理、塩処理、超音波処理を順に施すことにより、ほとんどの成分を可溶化できることを見いだした。しかしながら、この方法ではヒストン以外のクロマチン結合蛋白質は失われることがあきらかとなった。この間題点を克服するための方法について検討したが、後述のように、質量分析、インフオマティックス技術が向上したため、精製度については意識せず、界面活性剤により得られるラフな分画を解析に用いるのがよいと判断した。質量分析器を用いたタンバク質の定量解析技術の改良を沖縄大学院大学先行事業の長尾博土と協力して進めている。あるタンパク質に帰属する同定ペプチドの数が、絶対量と相関があることを利用して、検索エンジンの同定結果をプロセスして定量情報を抽出する一連の流れをほぼ確立した。これを用いることにより、大きな(1桁以上の)量的な変化があるタンパク質を見いだすことが可能である。また、この技術を基盤として、染色体の機能的に非常に重要な領域であるヘテロクロマチン領域について解析を行い、細胞周期による構成因子の違い、サブタイプによる構成因子の違いなどが明らかとなり、染色体構成因子のプロテオームの解析に目途がついたと考えられる。

从M相到复制的启动，将分布式染色体凝结并重建核膜的动态过程，并与细胞核的结构和功能直接相关的问题被冷凝，例如决定发展到下一个细胞周期的决定，以及随后复制开始复制复合物的形成。该目标是全面揭示从人类染色体的分布时间到通过使用质量分析通过蛋白质组学分析开始复制的染色体成分因子的定量变化。到目前为止，已经发现，大多数组件可以通过依次应用非离子表面活性剂治疗，微局局核酸酶处理，盐处理和超声处理来溶解。但是，这种方法表明，除组蛋白以外的其他染色质结合蛋白。尽管如下所述，研究了克服该问题的方法，但随着质谱和信息学技术的改进，决定使用表面活性剂获得的粗略分数进行分析而不意识到纯化程度，那将是更好的选择。我们正在努力使用大众分析仪与Nagao Hiroto合作，以提高储罐品质的定量分析技术，这是冲绳研究生大学的初步项目。利用归因于蛋白质与绝对量相关的已鉴定肽的数量，我们大致建立了一系列用于处理搜索引擎识别结果以提取定量信息的过程。使用此过程，可以找到具有大量定量变化的蛋白质（一个数量级或更多的蛋白质）。此外，基于这项技术，分析了异染色质区域，这是一个非常重要的染色体功能区域，并且由于细胞周期而引起的成分因子的差异和由于亚型引起的成分因子的差异被揭示出来，从而可以创造出对染色体组成型蛋白质组分析染色体蛋白质组的前景。

项目成果

染色体分配のための分子ネットワークのプロテオミクス解析

染色体分离分子网络的蛋白质组学分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: 共立出版株式会社・蛋白質・核酸・酵素 51
• 作者: Nishitani;H.;Sugimoto;N.;Roukos;V.;Nakanishi;Y.;Saijo;S.;Obuse.C.;Tsurimoto;T.;Nakayama;K.I.;Nakayama;K.;Fujita;M.;Lygerou;Z.;Nishimoto;T.;小布施力史
• 通讯作者: 小布施力史

Comprehensive analysis of the Interphase Centromere Complex components enriched in the CENP-A chromatin of human cells

人类细胞CENP-A染色质中富集的间期着丝粒复合体成分的综合分析

• 发表时间: 2006
• 期刊: Genes Cells (in press)
• 作者: M.Ikenol;H.Izuta;N.Suzukil;H.Yang;T.Tomonaga;N.Nozaki;C.Obuse;Y.Kisu;NGoshima;N.Nomura;K.Yoda
• 通讯作者: K.Yoda

Priming of Centromere for CENP-A Recruitment by Human hMis18α, β and M18BP.

人类 hMis18α、β 和 M18BP 启动着丝粒以招募 CENP-A。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Dev.Cell 12
• 作者: Fujita;Y.
• 通讯作者: Y.

Two E3 ubiquitin ligases, SCF-Skp2 and DDB1-Cu14, target human Cdt1 for proteolysis

两种 E3 泛素连接酶 SCF-Skp2 和 DDB1-Cu14，靶向人 Cdt1 进行蛋白水解

• 发表时间: 2006
• 期刊: EMBO J. (in press)
• 作者: H.Nishitani1;N.Sugimoto;V.Roukos;Y.Nakanishi;M.Saijo;C.Obuse;T.Tsurimoto;K.I.Nakayama;K.Nakayama;M.Fujita;Z.Lygerou;T.Nishimoto
• 通讯作者: T.Nishimoto

Two E3 ubiqutin ligase, SCF-Skp2 and DDB1-Cu14, target human Cdt1 for proteolysis.

两种 E3 泛素连接酶 SCF-Skp2 和 DDB1-Cu14 以人 Cdt1 为目标进行蛋白水解。

• 发表时间: 2006
• 期刊: EMBO Journal 25
• 作者: Nishitani;H.;Sugimoto;N.;Roukos;V.;Nakanishi;Y.;Saijo;S.;Obuse.C.;Tsurimoto;T.;Nakayama;K.I.;Nakayama;K.;Fujita;M.;Lygerou;Z.;Nishimoto;T.
• 通讯作者: T.