生体膜マイクロドメイン制御におけるプラスマローゲンの機能解明

阐明缩醛磷脂在生物膜微区调节中的功能

• 批准号: 16044235
• 负责人: 本庄 雅則
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16044235/
• 关键词: 生体膜; マイクロドメイン; プラスマローゲン

プラスマローゲンのマクロドメインにおける機能解明今年度新たにプラスマローゲン合成酵素単独欠損変異CHO細胞を分離し、その相補遺伝子の同定をおこなうとともに、CHO細胞の当酵素の塩基配列を決定した。さらに、当変異細胞において、当蛋白質のmRNAの著減が原因であることも明らかにした。また、当変異細胞と野性型細胞におけるマイクロドメインの比較から、プラスマローゲンはマイクロドメインの構成脂質、構成蛋白質において有意な差が観察されず、プラスマローゲンはマイクロドメインの構造維持には必要が無い事を明らかにした。次に、当変異細胞において、マイクロドメインの標識蛋白質であるモデルGPI結合型蛋白質の細胞内局在を観察したところ、野性型細胞に比べて、リサイクリングエンドソームにより局在していた。さらにモデルGPI結合型蛋白質が局在しているリサイクリングエンドソームでは細胞骨格系の蛋白質が観察された。以上の結果はGPI結合型蛋白質のリサイクリングエンドソームから細胞膜への再輸送過程がプラスマローゲンによって制御されていることを示唆している。また、プラスマローゲン合成の最終段階である小胞体から細胞膜に輸送されたプラスマローゲンの定量法を新たに確立した。さらに、いまだ不明な点が多い脂質の細胞内輸送のモデルとして、プラスマローゲンの細胞内輸送経路を検証し、プラスマローゲンの細胞膜への輸送は、小胞体からの分泌経路を阻害する薬剤に非感受性な輸送経路によって輸送されていることを明らかにした。

阐明缩醛磷脂大结构域的功能今年，我们新分离出了缺乏单一缩醛磷脂合酶的突变型CHO细胞，鉴定了其互补基因，并确定了CHO细胞中该酶的核苷酸序列。此外，研究表明，原因是该突变细胞中该蛋白质的 mRNA 显着减少。此外，通过比较该突变细胞和野生型细胞之间的微结构域，在微结构域的构成脂质和构成蛋白质中未观察到缩醛磷脂存在显着差异，这表明缩醛磷脂对于维持所揭示的微结构域的结构不是必需的。接下来，在这个突变细胞中，我们观察了模型 GPI 连接蛋白（微结构域的标记蛋白）的细胞内定位，发现它比野生型细胞更多地定位在回收内体中。此外，在循环内体中观察到细胞骨架蛋白，其中模型 GPI 连接蛋白位于其中。这些结果表明，GPI 连接蛋白从循环内体到质膜的再转运过程受到缩醛磷脂的调节。我们还建立了一种定量从内质网转运到细胞膜的缩醛磷脂的新方法，这是缩醛磷脂合成的最后一步。此外，我们验证了缩醛磷脂的细胞内转运途径作为细胞内脂质转运的模型，该途径仍存在许多未知点，并证明缩醛磷脂向细胞膜的转运对抑制内质分泌途径的药物不敏感。据透露，它们是通过各种运输路线运输的。