NF-κB活性化シグナルにおけるp65リン酸化の果たす役割
p65 磷酸化在 NF-κB 激活信号中的作用
基本信息
- 批准号:16022224
- 负责人:
- 金额:$ 2.3万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2004
- 资助国家:日本
- 起止时间:2004 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
NF-κB p65サブユニットSer-536のリン酸化の生理機能解析を、p65欠損MEFに野生型およびS536A変異体を再構築した細胞を用いて行った。その結果、S536A細胞においても正常に核移行およびDNA結合が認められ、リン酸化はp65の核移行やプロモーター領域への結合には影響しないことが明らかとなった。そこで、リン酸化の遺伝子発現に対する影響を調べるために、両細胞を用いたDNAマイクロアレイ解析を行った結果、S536A変異により発現が低下した遺伝子が53個、逆に発現が上昇した遺伝子が80個見出された。この遺伝子の中で、IKK欠損細胞でも発現が変動していることが報告されている遺伝子14個に絞り、Northern blot法によりmRNA発現を確認した結果、SerpinE2遺伝子の発現がリン酸化依存的に発現することを見出した。また、SerpinE2プロモーター解析を行った結果、-9kbpに存在するκB-like配列にp65が結合することが明らかとなった。現在、リン酸化の転写活性に果たす役割を明らかにするため、プロモーター領域にルシフェラーゼ遺伝子を連結したレポータープラスミドを作製中である。本検討はリン酸化の転写活性化における役割を網羅的に探索するものであり、標的遺伝子の機能解析を通じてリン酸化の抗アポトーシス活性を含めた生理機能解析に重要な情報を提供すると期待される。また、TNF-αによりSer-536リン酸化に関与するTAK1の活性化機構について検討した結果、活性化ループ内のThr-187のリン酸化がTAB1,TAB2により誘導され、逆にp38αによるフィードバック阻害機構において脱リン酸化されることを見出した。
使用用野生型和 S536A 突变细胞重建的 p65 缺陷 MEF 进行 NF-κB p65 亚基 Ser-536 磷酸化的生理分析。结果,在S536A细胞中观察到正常的核转位和DNA结合,并且揭示磷酸化不影响p65核转位或与启动子区域的结合。因此,为了研究磷酸化对基因表达的影响,我们使用两种类型的细胞进行了DNA微阵列分析,结果发现,由于S536A突变,53个基因表达减少,80个基因表达增加。 。在这些基因中,我们将其范围缩小到14个据报道即使在IKK缺陷细胞中表达也会波动的基因,并使用Northern印迹法确认了它们的mRNA表达。结果,SerpinE2基因表达以磷酸化依赖性方式表达。我知道该怎么做。此外,SerpinE2 启动子分析显示 p65 与 -9kbp 处存在的 κB 样序列结合。我们目前正在构建一个报告质粒,其中荧光素酶基因连接到启动子区域,以阐明磷酸化在转录活性中的作用。本研究全面探讨了磷酸化在转录激活中的作用,有望通过对靶基因的功能分析,为磷酸化的抗凋亡活性等生理功能分析提供重要信息。此外,通过研究TAK1参与TNF-α磷酸化Ser-536的激活机制,我们发现激活环中Thr-187的磷酸化是由TAB1和TAB2诱导的,反之,反馈抑制机制发现 p38α 被去磷酸化
项目成果
期刊论文数量(12)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- DOI:
- 发表时间:2005
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Pattama Singhirunnusorn;Min-Kyung Choo;Kriengsak Krilirdprapamongkol;Yoko Ueno
- 通讯作者:Yoko Ueno
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- DOI:
- 发表时间:2005
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Pattama Singhirunnusorn;Min-Kyung Choo;Kriengsak Krilirdprapamongkol
- 通讯作者:Kriengsak Krilirdprapamongkol
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- DOI:
- 发表时间:2005
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Pattama Singhirunnusorn;Min-Kyung Choo;Kriengsak Krilirdprapamongkol;Yoko Ueno;Isaku Yoshioka
- 通讯作者:Isaku Yoshioka
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