新規Akt結合蛋白の機能解析

新型 Akt 结合蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
16022229
负责人：
高橋雅英
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16022229/
关键词：
Akt アクチン細胞運動 siRNA

项目摘要

Aktはセリン、スレオニンキナーゼであり、受容体型チロシンキナーゼの下流のシグナル伝達因子として、細胞増殖、生存などに重要な役割を果たしていることが明らかになっている。Aktは原癌遺伝子の一種であり、その恒常的な活性化は細胞の癌化と密接に関わっていることが多くの例で示されている。Aktシグナル伝達経路の役割をさらに解明する目的で、yeast two hybrid法を用いてAkt結合蛋白質の同定を行った。その結果、AktのC末端領域と結合するクローンを同定し、全長cDNAのクローニングに成功した。アミノ酸配列の解析では既知の機能ドメインはなく、全く新規の分子であり、ノーザンブロット法により本遺伝子は、どの臓器にもubiquitousに発現していることが判明した。C末端領域にAktによってリン酸化されるコンセンサス配列が存在し、in vitro kinase assayやEGF刺激により活性化されたAktによってリン酸化されることから、Aktの新規基質である可能性が示唆された。作製した抗体で細胞内局在を検討したところ、アクチン細胞骨格系と共局在すると同時に、特に移動する細胞の先端部で活性化Aktと共局在していた。さらにBoyden chamberを用いたmigration assayを行った結果、C末端領域の過剰発現あるいはsiRNA存在下で、細胞の運動、接着が阻害されることから、細胞の移動、接着あるいは浸潤を制御している可能性が示唆された。

Akt是一种丝氨酸和苏氨酸激酶，已被揭示作为受体酪氨酸激酶的下游信号转导因子，在细胞增殖、存活等方面发挥着重要作用。 Akt 是一种原癌基因，其持续激活在许多情况下已被证明与细胞癌变密切相关。为了进一步阐明Akt信号通路的作用，我们使用酵母两种混合方法来鉴定Akt结合蛋白。结果，他们鉴定了一个与 Akt C 端区域结合的克隆，并成功克隆了全长 cDNA。氨基酸序列分析显示该基因没有已知的功能域，是一个全新的分子，Northern blotting显示该基因在所有器官中普遍表达。 C 端区域存在一条被 Akt 磷酸化的共有序列，并且通过体外激酶测定或 EGF 刺激激活 Akt，使其磷酸化，表明它可能是 Akt 的新型底物。当我们使用制备的抗体检查细胞内定位时，我们发现它与肌动蛋白细胞骨架系统共定位，同时与激活的 Akt 共定位，特别是在运动细胞的尖端。此外，使用Boyden小室进行的迁移测定结果表明，当C末端区域过表达或存在siRNA时，细胞运动和粘附受到抑制，这表明它可能控制细胞迁移、粘附或侵袭。。

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Biochemical and biological responses induced by coupling of Gab1 to phosphatidylinositol 3-kinase in RET-expressing cells.

DOI：
10.1016/j.bbrc.2004.08.095
发表时间：
2004-10
期刊：
Biochemical and biophysical research communications
影响因子：
3.1
作者：
Kengo Maeda;H. Murakami;Reiko Yoshida;M. Ichihara;A. Abe;M. Hirai;T. Murohara;Masahide Takahashi
通讯作者：
Kengo Maeda;H. Murakami;Reiko Yoshida;M. Ichihara;A. Abe;M. Hirai;T. Murohara;Masahide Takahashi