プロテインダイナミクスのプロテオーム解析に関する基礎的研究

蛋白质动力学蛋白质组学分析基础研究

基本信息

批准号：
16013239
负责人：
榊原陽一
金额：
$ 3.2万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞のシグナル応答によって誘導されるタンパク質のダイナミックな挙動をプロテオーム解析により網羅的に解析できる分析方法の確立を目的とし、そのための細胞分画条件、二次元電気泳動による分離条件の検討を行った。哺乳動物の細胞膜には、コレステロールやスフィンゴ脂質に富んだメンブランマイクロドメイン(ラフト)が存在する。近年、これらは細胞間情報伝達の場として重要な機能を持つことが明らかとなりつつある。細胞がシグナルを受け取ったときに多くのシグナル分子がこのラフト画分に集積してくることが報告されている。そこでシグナル伝達系の網羅的解析を目的としラフツ画分へ移行するタンパク質の網羅的解析によるシグナル伝達系全貌解明の糸口を見つける。またラフトの動的制御機構とコレステロール硫酸化の関係について検討する。さらに、タンパク質の細胞内輸送機構に関与すると考えられる翻訳後修飾としてのチロシン硫酸化の機能を解明するためにTyrosylprotein Sulfotransferase(TPST)の諸性質の比較検討を行った。ラフトの制御機構としてコレステロールの硫酸化が関与している可能性が示された。コレステロール硫酸化がアンカータイプチロシンキナーゼLckやシグナルアダプターLATの局在に影響する可能性が示された。'さらに、コレステロール硫酸化によりラフトから細胞質に局在性を変化するタンパク質を解析した結果、機能未知のタンパク質の存在が確認できた。2種類存在するタンパク質チロシン硫酸転移酵素(TPST)の諸性質を比較検討し、タンパク質機能の多様性へのチロシン硫酸化の関与を検討した。さちに、カタユウレイボヤのタンパク質チロシン硫酸転移酵素(TPST)をクローニングした。

目的是建立一种分析方法，该方法可以通过蛋白质组学分析通过细胞信号反应诱导的蛋白质的动态行为，并研究了细胞分馏条件和通过二维电泳的分离条件。哺乳动物细胞膜含有富含胆固醇和鞘脂的膜微域（筏）。近年来，很明显，这些功能具有重要的功能，作为细胞 - 细胞通信的站点。据报道，当细胞收到信号时，许多信号分子在该筏部分积聚。因此，为了全面分析信号转导系统，我们通过对迁移到木筏分数的蛋白质进行全面分析来找到阐明整个信号转导系统的线索。我们还将研究筏的动态控制机制与胆固醇硫酸化之间的关系。此外，为了阐明酪氨酸硫酸化作为翻译后修饰的功能，被认为与蛋白质的细胞内转运机制有关，我们比较了酪酶基蛋白硫代转移酶（TPST）的特性。已经表明，胆固醇硫酸化可能是作为木筏的控制机制涉及的。已经表明，胆固醇硫酸化可能会影响锚型酪氨酸激酶LCK和信号适配器LAT的定位。 '此外，分析了通过胆固醇硫酸盐从筏子到细胞质改变定位的蛋白质证实，存在具有未知功能的蛋白质。比较了两种类型的蛋白质硫酸酪氨酸转移酶（TPST）的性质，并研究了酪氨酸硫酸化在蛋白质功能多样性中的参与。将Sachin克隆到硫酸酪氨酸转移酶（TPST）中。