プロテインダイナミクスのプロテオーム解析に関する基礎的研究

蛋白质动力学蛋白质组学分析基础研究

基本信息

批准号：
14014240
负责人：
榊原陽一
金额：
$ 3.84万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞のシグナル応答によって誘導されるタンパク質のダイナミックな挙動をプロテオーム解析により網羅的に解析できる分析方法の確立を目的とし、そのための細胞分画条件、二次元電気泳動による分離条件の検討を行う。哺乳動物の細胞膜には、コレステロールやスフィンゴ脂質に富んだメンブランマイクロドメイン(ラフト)が存在する。近年、これらは細胞間情報伝達の場として重要な機能を持つことが明らかとなりつつある。細胞がシグナルを受け取ったときに多くのシグナル分子がこのラフト画分に集積してくることが報告されている。そこでシグナル伝達系の網羅的解析を目的としラフツ画分へ移行するタンパク質の網羅的解析によるシグナル伝達系全貌解明の糸口を見つける。またラフトの動的制御機構とコレステロール硫酸化の関係について検討する。ラフトは疎水性の強い膜画分であり、通常使用されている二次元電機泳動の条件では分析することが困難である。そこで、非界面活性剤スルホビテインを使用した膜タンパク質の分離条件の検討を行った。その結果、NDSBを使用することで膜タンパク質のIPGストリップによる一次元電気泳動での分離が向上した。さらに、ラフトの制御機構としてラフト画分のコレステロールの硫酸化に着目した研究を行った。まず生体内でコレステロールの硫酸化に関与する硫酸転移酵素を同定した。その結果、ヒトおよびマウスにおいてSULT2B1と分類される硫酸転移酵素がラフトコレステロールを硫酸化することが判明した。コレステロール硫酸化の結果、ラフトに局在化する膜タンパク質が可溶性画分に局在性を変えることが生化学的な実験より明らかとなった。現在、ラフトの制御機構としての硫酸化の可能性を培養細胞レベルで検討中である。

为了建立一种能够通过蛋白质组分析全面分析细胞信号反应诱导的蛋白质动态行为的分析方法，我们将通过二维电泳研究细胞分级条件和分离条件。哺乳动物细胞膜含有富含胆固醇和鞘脂的膜微区（筏）。近年来，人们已经清楚这些细胞作为细胞间信息传递场所具有重要的功能。据报道，当细胞接收到信号时，许多信号分子会积聚在该筏部分中。因此，以综合分析信号转导系统为目的，通过综合分析迁移到筏部分的蛋白质，我们将找到阐明整个信号转导系统的线索。我们还将研究筏的动态控制机制与胆固醇硫酸化之间的关系。筏是高度疏水性的膜部分，很难使用常用的二维电泳条件进行分析。因此，我们研究了使用非表面活性剂磺基甜氨酸分离膜蛋白的条件。因此，NDSB 的使用改善了使用 IPG 胶条进行膜蛋白的一维电泳分离。此外，我们重点关注筏部分中胆固醇的硫酸化作为筏的调节机制。首先，我们鉴定了一种参与体内胆固醇硫酸化的磺基转移酶。结果表明，一种名为 SULT2B1 的磺基转移酶可硫酸化人类和小鼠的筏胆固醇。生化实验表明，由于胆固醇硫酸化，位于筏中的膜蛋白将其定位改变为可溶性部分。我们目前正在研究硫酸化作为培养细胞水平的筏调节机制的可能性。