動脈硬化に関連した動脈壁平滑筋炎症制御因子のゲノム網羅的探索

全基因组搜索与动脉硬化相关的动脉壁平滑肌炎症调节因子

基本信息

批准号：
16012245
负责人：
白井睦訓
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

肺炎クラミジアの冠状動脈硬化部における感染状況を調べたところ、軽度、高度狭心症計50人の冠動脈硬化部の平滑筋細胞組織の100%で動脈壁平滑筋細胞に肺炎クラミジアの高密度感染を検出し、局所炎症の惹起に関与していた。肺炎クラミジアの約100遺伝子は真核生物の遺伝子に類似する。これら主要な病原因子と相互作用するヒト大動脈遺伝子を2ハイブリッド法を用いてcDNAライブラリーから検出した。肺炎クラミジアset遺伝子(ヒトクロマチン関連因子ホモローグ)やmpg1遺伝子は肺炎クラミジア自身か宿主のクロマチン構造に関連すると考えられ、ある種の細胞外マトリックス蛋白質(大動脈壁平滑筋層で弾性を制御している細胞外マトリックスタンパクファミリーフィブリンのEGF様Ca結合ドメイが相互作用ドメインであった)との相互作用が同定された(クラミジア感染患部で、大動脈弾性繊維の断裂病変形成に関与?)。この肺炎クラミジアのキネシン/ミオシン類似因子であるKhc蛋白質や封入体膜構成蛋白質であるIncA2をベイトにすると、それぞれミトコンドリア膜に局在する蛋白質ATP6,NADH dehydrogenaseとamine oxidaseが同定された(大動脈平滑筋細胞の増殖や脱分化制御に関与?)。この封入体膜遺伝子をHeLa細胞に導入・発現させたところ、発現タンパク質の局在はミトコンドリアに一致しており同膜電位を変化させて透過性に関与することがわかった。同遺伝子導入細胞はアポトーシスを起こしやすいことを解明した。これら相互作用因子の結合ドメインも解明した。それらの相互作用による宿主細胞変化をさらに解析中である。その他約80の全く新しい肺炎クラミジア菌?宿主間タンパク相互作用を検出している。50種程度の薬物スクリーニングの結果、アスピリンなど数種の薬物が肺炎クラミジア感染排除に働くことも判明した。肺炎クラミジア近縁種のクラミジア・フェリスの全ゲノム構造を決定したので両菌遺伝子の比較解析により動脈硬化関連因子探索の手がかりとなることが期待される。ヒト正常大動脈由来平滑筋細胞とHEp2細胞(対照)それぞれに肺炎クラミジア、クラミジア・フェリス菌を感染させて、ヒト3万遺伝子発現をマイクロアレイ解析して動脈硬化・心筋梗塞関連遺伝子データベースと比較することにより、肺炎クラミジア感染大動脈由来平滑筋にユニークな動脈硬化症関連遺伝子16コと新たな動脈硬化関連候補遺伝子合計224個を検出した)。

我们在调查冠状动脉硬化中肺炎衣原体的感染状况时发现，50例轻度和重度心绞痛患者冠状动脉硬化中的平滑肌细胞100%有动脉壁肺炎衣原体高密度感染。检测到平滑肌细胞并参与局部炎症的诱导。肺炎衣原体大约有 100 个基因与真核基因相似。使用双杂交方法从 cDNA 文库中检测到与这些主要致病因素相互作用的人类主动脉基因。肺炎衣原体set基因（人类染色质相关因子同源物）和MPG1基因被认为与肺炎衣原体本身或宿主的染色质结构有关，并与某些细胞外基质蛋白（控制细胞弹性的细胞）相关。发现了与纤维蛋白（一种外部基质蛋白家族）的 EGF 样 Ca 结合结构域的相互作用（可能参与受衣原体影响的区域主动脉弹性纤维破裂病变的形成）。感染）。以肺炎衣原体的驱动蛋白/肌球蛋白样因子Khc蛋白和包涵体膜构成蛋白IncA2为诱饵，定位于线粒体膜的蛋白质ATP6、NADH脱氢酶、胺氧化酶，分别被鉴定（在主动脉平滑肌中）（它是否参与控制细胞增殖和去分化？）当将该包涵膜基因导入HeLa细胞并表达时，发现表达蛋白的定位与线粒体相对应，并且发现它通过改变膜电位参与通透性。我们发现引入相同基因的细胞更有可能发生细胞凋亡。这些相互作用因子的结合域也得到了阐明。我们目前正在分析这些相互作用引起的宿主细胞的变化。已检测到大约 80 种其他全新的肺炎衣原体-宿主蛋白相互作用。对约50种药物进行筛选后发现，包括阿司匹林在内的多种药物可以消除肺炎衣原体感染。我们已经确定了与肺炎衣原体密切相关的猫衣原体的整个基因组结构，预计对两种细菌的基因进行比较分析将为寻找与动脉粥样硬化相关的因素提供线索。人类正常主动脉来源的平滑肌细胞和HEp2细胞（对照）被肺炎衣原体和猫衣原体感染，通过微阵列分析30,000个人类基因的表达，并与动脉硬化和心肌梗塞相关基因数据库进行比较（16.在肺炎衣原体感染的主动脉来源的平滑肌中检测到了独特的动脉粥样硬化相关基因和总共224个新的动脉粥样硬化相关候选基因。