「DNA複製」と「異常DNA構造の認識・修復」の共役機構に関する研究

“DNA复制”与“异常DNA结构识别与修复”耦合机制研究

基本信息

批准号：
14033204
负责人：
多田周右
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝情報安定性に寄与するRecQヘリカーゼとDNA複製開始に働くDpb11との関係に着目し、DNA複製開始制御機構とDNA安定性維持機構との間の共役について酵母遺伝学を用いた解析をおこなうことを目指した。また、Xenopus卵抽出液を用いた実験系でもDNA複製開始制御機構の研究を発展させると共に、この制御機構においてRecQヘリカーゼが機能するのか否かを検討し、機能するならばその機序について生化学的に解析することを目指した。結果として、出芽酵母Dpb11の関連する経路と出芽酵母Sgs1の関連する経路との間の連携を示唆する遺伝学的解析の結果が得られた。生化学的解析の手がかりとして、酵母の遺伝学的解析からDNA複製開始に必須であるとされるSld2と相同な領域を有し、高発がん性、早期老化を特徴とするロスムンド-トムソン症候群の原因遺伝子産物であるRecQL4に焦点を絞り、そのXenopus相同タンパク質の遺伝子を発見・単離した。Xenopus RecQL4の特異的抗体を作成、利用することにより、RecQL4がDNA複製に必須ではなく、その効率にも影響を与えないにもかかわらず、DNA複製の異常に応じてクロマチン上に蓄積することを示唆する結果を得た。さらに、DNA二本鎖切断に応じてRecQL4がクロマチン上に結合することを見いだし、この結合が一本鎖DNA結合タンパク質RPAの存在に依存するが、組換えタンパク質であるRad51のクロマチン結合には依存していないことを明らかにした。また、Xenopus卵抽出液を用いたDNA複製開始機構の解析として、DNA複製開始に重要な役割を果たすMCM複合体をクロマチン上に結合させる際のCdt1の作用機序について検討し、Cdt1の作用に先んじてCdc6がクロマチン上に結合する必要があることを示した。

重点关注RECQ解旋酶之间的关系，这有助于遗传信息稳定性和DPB11（充当DNA复制的启动），我们旨在分析DNA复制起始控制机制与使用酵母基因学的DNA复制起始控制机制与DNA稳定性维持的结合。此外，我们旨在使用爪蟾卵提取物在实验系统中对DNA复制起始控制机制进行研究，并研究RECQ解旋酶是否在此控制机制中功能以及该机制的生化分析。结果，遗传分析的结果表明，萌芽的酵母DPB11的相关途径与萌芽的酵母菌SGS1的相关途径之间存在联系。作为生化分析的线索，我们专注于RECQL4，RECQL4是Rossmund-Thomson综合征的基因致病产物，该综合征具有与SLD2同源的区域，据说这对于从酵母菌遗传分析中启动DNA复制至关重要，并由高碳和早期的基因和孤立的基因概念和孤立的基因概念和孤立的基因概念概念。结果创建和利用Xenopus recql4的特定抗体，结果表明，RECQL4在DNA复制中响应异常而积聚在染色质上，尽管它对于DNA复制并不必不可少，并且不影响其效率。此外，我们发现RECQL4响应DNA双链断裂，与染色质结合，表明这种结合取决于重组蛋白RAD51的单链DNA结合蛋白RPA的存在，但不存在重组蛋白的染色质结合。此外，作为对使用爪蟾卵提取物进行DNA复制起始机制的分析，我们研究了CDT1结合MCM复合物的作用机理，该MCM复合物在染色质上在DNA复制中起着重要作用，并在染色质上起着重要作用，并显示CDC6必须与CDT1的染色质结合在CDT1的作用之前。