ヘリコバクター・ピロリVacA毒素の空胞致死活性機序

幽门螺杆菌VacA毒素的液泡致死活性机制

基本信息

批准号：
14021091
负责人：
平山壽哉
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)VacAによる空胞形成作用についての解析:VacAによる空胞形成に関わるSNARE蛋白の同定を目的として免疫組織化学によりスクリーニングしたところ、SNARE蛋白の一つであるSyntaxin 7が空胞上に存在することが分かった。このSyntaxin 7は正常細胞においてはlate endosomeとlysosomeの融合に働いていると考えられているので、このVacAによる空胞がその二者の病的融合で形成されるとの仮説と合致する。ヒトsyntaxin 7遺伝子をクローニングし、GFP-tagged wild-type Syntaxin 7を培養胃上皮細胞に強制発現させてVacA曝露によるその細胞内局在の変化を観察したところ、非曝露細胞ではGFP-tagged wild-type Syntaxin 7はその生理的局在位置であるライソゾームおよび後期エンドソームに存在したが、VacA曝露後に形成された空胞上へとGFP-tagged wild-type Syntaxin 7の局在は変化した。更に、dominant-negative type Syntaxin 7を強制発現させた培養胃上皮細胞ではVacAによる空胞形成が著明に抑制された。しかし、dominant-negative type Syntaxin 7の強制発現はVacAの細胞内への浸潤には影響を与えなかったので、dominant-negative type Syntaxin 7によるVacA空胞形成の抑制はVacAの細胞内への移行を阻害することに起因するのではなく、dominant-negative type Syntaxin 7が直接的に空胞形成を阻害した結果と考えられ、VacAによる空胞形成にはSyntaxin 7が関与していることが明らかとなった。2)VacAによる細胞致死作用についての解析:VacAを胃由来株化細胞に作用させるとMAPキナーゼのうちp38、Erk1/2のリン酸化の亢進が認められたが、JNKのリン酸化亢進は認められなかった。p38のリン酸化はkinase活性化を引き起こし、その活性はSB203580で阻害ざれたが、VacAによるチトクロームCの遊離はSB203580では阻害しなかった。VacAによるチトクロームCの遊離とErk1/2の活性化との関連について研究を進めている。3)VacAのマスト細胞への作用と血清成分による空胞活性阻害:VacAはマスト細胞に作用しTNFα,MIP-1α,IL-1β,IL6,IL-10,IL-13などの産生を促す。また、FCSにはVacAの受容体結合を阻止して、空胞化活性を抑制する糖蛋白質が存在することを見出した。

1）VACA的空序列效应分析：通过vaca Syntaxin 7（Syntaxin 7）的筛选，目的是识别与空白蛋白相关的SNARE蛋白质，这是SNARE蛋白之一。该语法7被认为可用于正常细胞中晚期内体和溶酶体的融合，因此与假设相匹配，即该VACA可以由两个人不利的融合形成。人索法素7克隆了基因，并强迫GFP标记的野生型语法7中的胃上皮细胞中，观察VACA暴露于VACA引起的VACA暴露的变化。 - 野生型语法7已因vaca暴露后形成的空原因而发生了变化。此外，在强迫主导性阴性语法7的培养胃上皮细胞中，使用VACA的空当代被显着抑制。但是，主导性阴性类型语法7的强制表达不会影响VACA浸润到细胞细胞中，因此通过显性阴性型语法7抑制VACA的空态，这是对Vaca细胞的过渡。 - 阴性语法7直接抑制空细胞形成，而不是由于阻碍，很明显，语法素7参与了VACA的空遏制。 2）VACA对细胞致命作用的分析：当VACA对胃部库存作用时，MAP激酶中p38和ERK1/2的磷酸化增加，但未观察到JNK的氢氧化物。 p38的磷酸化引起激酶的活化，其活性受SB203580的抑制，但是VACA ColiChrome C的释放并未与SB203580抑制。我们正在研究VACA对Chitochrome C发掘与ERK1/2的振兴之间的关系。 3）VACA对血清成分引起的肥大细胞和抑制性抑制作用的作用：VACA作用于肥大细胞上并促进产量，例如TNFα，MIP-1α，IL-1β，IL6，IL6，IL-10，IL-13。它还发现FCS具有一种糖蛋白，可防止VACA的受体键并抑制空缺活性。