世界的大流行をおこしている腸炎ビブリオ新クローンの病原性に関する分子遺伝学的研究

导致全球大流行的副溶血弧菌新克隆致病性的分子遗传学研究

基本信息

批准号：
14021049
负责人：
西渕光昭
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021049/
关键词：
世界的大流行腸炎ビブリオハイブリダイゼーション

项目摘要

1.腸炎ビブリオVP81株(O3:K6,新型クローン)のゲノムをテスター,U-5474株(O3:K6,新クローンに属さない)のゲノムをドライバーとして,subtractive hybridization法によって,VP81株ゲノムに特異的な塩基配列の候補92種類をクローン化した。クローン化したDNAのそれぞれを^<32>Pで標識してプローブとし、世界各地で分離された種々の菌株の代表菌株(GS-PCR陽性31株、陰性27株)との反応をハイブリダイゼーション法で検査した。その結果、新クローンに特異性のあるクローン2種、部分的に特異性のあるクローン2種が同定できた。塩基配列を解析した結果、特異性のあるクローンは腸炎ビブリオ以外の種々の細菌種と部分的に相同性のあるモザイク様配列から成っていた。現在、クローン化した新クローンに特異性のある塩基配列の周辺部塩基配列をwalking法によって解析しており、どのような遺伝子が含まれ、どのような機能を果たしているかを明らかにする予定である。2.新クローンの耐熱性溶血毒(TDH)の産性量については、すでに蛋白レベルで調べたが、今回遺伝子の転写レベルを確認した。TRC法を適用して新しく開発した方法によってtdh遺伝子特異的mRNAを定量することが可能になったので、この方法で調べたところ新クローンと従来の神奈川現象陽性株とで転写レベルに特に大きな差はなかった。3.バングラデシュにおける共同研究において、tdh遺伝子陽性菌株(多くは新クローンに属する)に感染した患者において、TDHに対して強い特異的な免疫反がおこっていることを明らかにした。

1。Tester，U-5474股份（O3：K6，不属于新克隆），具有颤音颤音的基因组（O3：K6，新克隆），作为驱动程序，减法杂交法，VP81股票基因组是特定的基本序列的候选者已被克隆。每个克隆的DNA都是在^<32> p中制成的，它是一个探针，杂交方法已与代表性细菌（GS-PCR阳性31股，27个负股份）杂交。结果，确定了新克隆中具有特殊性的两种类型的克隆和两个部分特定的克隆。由于分析了基本序列，奇特的克隆由镶嵌序列与部分家乡组成，除肠炎弧菌以外的各种细菌物种。当前，通过步行方法分析具有独特克隆的基本序列的外围序列，并将澄清包括哪种基因以及执行哪些功能。 2。在蛋白质水平上已经检查了新克隆的耐热溶血毒药（TDH）的生产率，但这次确认了基因的转移水平。 TDH基因特异性mRNA特异性mRNA可以通过使用TRC方法来定量。 3。在孟加拉国进行的一项联合研究表明，感染了TDH基因阳性细菌（主要属于新克隆）的患者对TDH具有强烈的特异性免疫叛乱。