真核生物染色体DNAの複製開始・伸長のMcm10タンパク質によるモニター機構

Mcm10蛋白监测真核染色体DNA复制起始和延伸的机制

基本信息

批准号：
11241202
负责人：
川崎泰生
金额：
$ 20.16万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物共通の染色体複製のメカニズムと複製開始・伸長のモニター機構を解明するために出芽酵母をモデル系として、染色体DNAの複製に必要である幾つかの因子について遺伝学的、生化学的、および細胞生物学的なアプローチを行ってきた。Mcm10は核内に局在してORC(Origin Recognition Complex)と共局在し、G1期においてはMcm7の局在とも一致するので核内の複製開始場所をつかさどってことが示唆された。mcm10変異との合成致死変異を分離することにより遺伝学にMcm10と相互作用する因子をスクリーニングしたところ、6種類の相補群に分けられる変異を分離することができた。そのうち、複製開始に関与する因子の変異が分離され、これはMcm10が複製開始に関与することを積極的に支持した。Mcm10は複製フォークの機能に積極的に関与し、Mcm10の欠損がS期の進行全体に影響を及ぼす可能性が示唆された。得られた新規の遺伝子SLM2、SLM6については、mcm10変異株では複製フォークの進行がゲノム上の至る所で妨げられ、異常な複製中間体が蓄積することを考えあわせると、Slm2/Slm6はこの様な複製異常を認識、修復している可能性がある。一方、出芽酵母のタンパク質抽出液を用いた試験管内複製開始複合体形成系を導入・改良し、複製開始に必須な役割を持つCdc7/Dbf4タンパク質リン酸化酵素の複製開始複合体への結合を解析した。今までのところ、S期に入ってからCdc7/Dbf4複製開始複合体へ結合し、その結合はS期チェックポイントの制御下に置かれていることを示唆する結果が得られている。

为了阐明真核生物常见的染色体复制机制以及复制起始和延伸的监测机制，我们使用酿酒酵母作为模型系统来研究染色体DNA复制和细胞必需的几个因素的遗传、生化和遗传方面。生物学方法。 Mcm10定位在细胞核中并与ORC（起源识别复合体）共定位，并且也与Mcm7在G1期的定位一致，表明它负责细胞核中的复制起始位点。当我们通过分离具有 mcm10 突变的合成致死突变来对与 Mcm10 相互作用的因子进行基因筛选时，我们能够分离出可分为六个互补组的突变。其中，分离出参与复制起始的因子的突变，这积极支持了Mcm10参与复制起始。 Mcm10 积极参与复制叉的功能，表明 Mcm10 的缺失可能会影响 S 期的整个进程。对于新获得的基因SLM2和SLM6，考虑到在mcm10突变株中，整个基因组的复制叉的进展受到阻碍并且异常的复制中间体积累，Slm2/Slm6有可能以这种方式进行复制。异常被识别并修复。另一方面，我们引入并改进了使用酿酒酵母蛋白质提取物的体外复制起始复合物形成系统，并分析了在复制起始中起重要作用的Cdc7/Dbf4蛋白激酶与复制起始复合物的结合。做过。到目前为止，已经获得的结果表明，它在进入S期后与Cdc7/Dbf4复制起始复合物结合，并且这种结合受到S期检查点的控制。