パーキンソン病におけるミトコンドリア遺伝子変異蓄積の病態への関与

线粒体基因突变积累参与帕金森病病理学

• 批准号: 08256212
• 负责人: 田中 雅嗣
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08256212/
• 关键词: ミトコンドリア遺伝子; 脂質過酸化; パーキンソン病; 脂質アルデヒド; 体細胞変異; 黒質; 酸化的ストレス; 百寿者

1.脂質アルデヒド(4-hydrpxy-2-nonenal,HNE)のヒスチジン残基への付加物に対する特異抗体を用いて中脳の免疫組織化学染色を行い、陽性に染まる黒質神経細胞の割合が正常コントロールと比較してパーキンソン病患者において有意に高いことを明らかにした(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:2696-2701,1996)。2.抗HNE抗体によってミトコンドリアに局在する2種の蛋白質が免疫染色されることを見いだし、酸化的ストレスに曝されている組織において脂質アルデヒドによるミトコンドリア蛋白の修飾と機能抑制が重要であると示唆された。3.パーキンソン病患者と百寿者のmtDNA遺伝子型の比較:既に分析の終了しているパーキンソン病患者5例に加えて5例の線条体mtDNAに解析を行った。コントロールとして11例の百寿者のmtDNAの塩基配列決定を行った。現在、変異の構造と機能に対する影響を検討し、発表を準備中である。4.パーキンソン病の線条体におけるmtDNAの点変異蓄積の解析を行った。パーキンソン病患者3例の線条体からmtDNA断片を増幅し3症例からそれぞれ60クローンを単離し、合計180クローンについて塩基配列を解析した。同様に中年のコントロール3例と高年齢コントロール3例の線条体からそれぞれ20クローンを単離し、合計120クローンについて塩基配列を解析した。その結果、パーキンソン病患者において、点変異の頻度が中年のコントロールおよび高年齢コントロールよりも有意に高いことを見いだした(Kovalenko et al.投稿準備中)。

1。中脑的免疫组织化学染色是使用对脂质醛（4-Hydrpxy-2-nonenal，hne）加合物中的特定抗体进行的，以揭示阳性染色的NIGRA神经元的比例在帕克森氏病与正常对照组相比的患者（Proc.nat。 93：2696-2701，1996）。 2。我们发现，两种线粒体局部蛋白通过抗HNE抗体免疫染色，表明通过脂质醛修饰和抑制线粒体蛋白在暴露于氧化应激的组织中很重要。 3。在帕金森病患者和百年患者中的mtDNA基因型的比较：除了五个患有帕金森氏病的患者外，对五个纹状体mTDNA进行了分析。作为对照，测序了11个百年纪念的mtDNA。目前，我们正在考虑突变对结构和功能的影响以及准备演示文稿。 4。对帕金森氏病纹状体中mtDNA点突变的积累进行了分析。从三个帕金森氏病患者的纹状体中扩增mtDNA片段，并从三个病例中的每一个中分离出60个克隆，并分析了基本序列的总共180个克隆。类似地，从三个中年对照病例和三个较旧的对照病例的纹状体中分离出20个克隆，并分析了总共120个克隆的基础序列。结果，我们发现帕金森氏病患者的点突变频率明显高于中年和较旧的对照（Kovalenko等人准备发布）。

项目成果

Nakamura N: "Specific detection of deleted mitochondrial DNA by in situ hybridization using a chimera probe." Biochem.Biophys.Acta.1308. 215-221 (1996)

Nakamura N：“使用嵌合探针通过原位杂交特异性检测缺失的线粒体 DNA。”

Islam MM: "Primary structure of the Smallest (6.4kDa) subunit of human and bovine ubiquinol-cytochrome a reductase deduced from cDNA sequences." Biochem.Biophys.Biol.Int.(in press). (1997)

Islam MM：“从 cDNA 序列推导出的人和牛泛醇细胞色素还原酶最小 (6.4kDa) 亚基的一级结构。”

Tanaka M: "Automated sequencing of mitochondrial DNA." Methods Enzymol.264. 407-421 (1996)

Tanaka M：“线粒体 DNA 的自动测序。”

Morikawa S: "Increased mitochondrial damage by lipid peroxidation in trophoblast cells of preeclamptic placentas." Biochem.Mol.Biol.Int.(in press). (1997)

Morikawa S：“先兆子痫胎盘滋养层细胞中脂质过氧化增加了线粒体损伤。”

Tanaka M: "Accumulation of deletions and point mutations in mitochondrial genome in degenerative diseases." Ann.NY Acad.Sci.786. 102-111 (1996)

Tanaka M：“退行性疾病中线粒体基因组缺失和点突变的积累。”