トリプレット・リピート伸長cDNA発現細胞とアポトーシス

表达三联体重复扩增 cDNA 的细胞和细胞凋亡

基本信息

批准号：
08256208
负责人：
石浦章一
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経変性のモデル細胞系の確立を目的として、トリプレット・リピートを伸長させたcDNAの発現系を構築し、解析した。材料は、我々がクローニングした筋緊張性ジストロフィー原因遺伝子MtPKであり、3′非翻訳料域に存在するトリプレットCTG数を0から46に伸長させたcDNA(0と正常の5、及び46)を筋芽細胞株L6並びにC2C12に導入した。その結果、発現したMtRKは筋小胞体に局在し、特に安定形質発現させたC2C12細胞では、リピートの伸長と筋分化の遅れが比例していることが明らかとなった。次に、パッチクランプ法を用いて遺伝子導入したC2C12細胞でのMtPK過剰発現の効果を調べたところ、MtPKの発現が増すにつれて細胞内からの塩素イオンの流出が顕著になることがわかった。また、塩素チャンネルの性質を電気生理的手法を用いて検討したところ、コンダクタンスには変化が見られなかったが、開口確率は上昇し、時定数も上昇していることが判明した。この事実は、小胞体に発現したMtPKが、情報伝達過程を介して細胞膜のイオンチャンネル活性を変化させていることを示唆するものであった。一方、バキュロウイルスで発現させたMtPKには確かに自己リン酸化活性が認められたため、以上の情報伝達仮説は立証に値するものと考えられた。今後は、MtPKの直接の基質の探索を行う予定である。

为了建立神经模型细胞系统，建立并分析了扩展三重重复的cDNA表达系统。该材料是克隆的肌肉张力，基因mtpk和三个非翻译费范围内存在的三重CTG的基因MTPK和cDNA（0，正常5和46），从0到46。剧透L6和C2C12。结果，揭示了表达的MTRK位于肌肉或小细胞中，尤其是在稳定的C2C12细胞中，重复延伸的延迟和肌肉分裂的延迟是成比例的。接下来，使用斑块夹方法检查MTPK过度打印在C2C12细胞中的影响表明，随着MTPK的表达的增加，氯离子的流出变得显着。此外，使用电和生理方法检查了氯通道的性质，发现避孕药的构成没有变化，但是开放的可能性增加了，时间增加了。这一事实表明，在音节中表达的MTPK通过信息传输过程改变了细胞膜的离子通道活性。另一方面，在真空病毒中表达的MTPK肯定具有自磷酸化活性，因此认为上述信息传递假说被认为是考虑的。将来，我们计划探索MTPK的直接底物。