ヒト巨核球の増殖・分化・成熟機序に関する研究:巨核芽球細胞株による解析

人类巨核细胞增殖、分化和成熟机制的研究：巨核细胞系分析

基本信息

批准号：
03252203
负责人：
斎藤英彦
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は巨核芽球細胞株(MEGー01)の樹立(Blood66:1384,1985)を報告して以来,本細胞株におけるホルボルエステルによる分化誘導(Blood72:49,1988),分化誘導時のプロテインキナ-ゼCの細胞内局在の変化(J cell Biol107:929,1988),トロンボモジュリンの局在および産生(Thromb Haemostas64:297,1990),細胞内CーAMPによるトロンボモジュリンの発現増強(Thromb Res58:615,1990)など巨核球分化および機能に関する研究に取り組んできた。これらの研究成果に基づき,今年度は新たに以下の研究をまとめた。(Arch Biochem Biophy291:218,1991)。プロテインキナ-ゼC(PKC)は,細胞内カルシウム(Ca)やジアシルグリセロ-ル(DG)の濃度レベルに応じて,細胞膜へ移行し活性化することが知られており,また凝固因子の一つであるトロンビンは血小板のイノシト-ルリン脂質代謝を促進し,細胞内Ca濃度を上昇させることが報告されているので,この巨核球マ-カ-をもつMEGー01細胞において,トロンビン刺激時の細胞内CaとDGのレベルを測定し,PKCの細胞内移行による膜への局在性の変化を免疫化学的手法を用いて経時的に解析した。0.5u/mlのトロンビンで刺激後,15秒でPKCの細胞膜への局在化が認められ,90秒で最高に達した。細胞内でCa濃度も15秒内に急上昇し,60秒で最大となり,10分後もそのレベルで留まった。DGのレベルは二相性で,最初の上昇は15秒内に起こり,60秒後の低下の後,再び10分以上の上昇を維持した。しかしこれらの高値にもかかわらず,PKCの局在は10分後には細胞膜より解離し,細胞質内へ散在していた。PKCインヒビタ-であるH7存在下では,CaやDGの濃度パタ-ンを修飾することなく,PKCの膜への局在化が量的にも時間的にも増強されていた。これらの結果は,トロンビン刺激で細胞内CaやDGレベルが上昇し,PKCが細胞膜へ移行,PKCにより活性化されたシグナル伝達系により更に,PKCのダウンレギュレ-ションが起こることを示している。

Since reporting the establishment of a megakaryoblast cell line (MEG-01) (Blood66:1384, 1985), we have been working on research into megakaryocytic differentiation and function, including induction of differentiation by forboresters (Blood72:49, 1988), changes in the subcellular localization of protein kinase C upon induction of differentiation (J cell Biol107:929, 1988),血小板结合蛋白的定位和产生（血栓止血64：297，1990），并通过细胞内C-AMP（颗粒RES58：615，1990）增强血小板蛋白表达。基于这些研究结果，今年进行了以下新研究。（Arch Biochem Biophy291：218，1991）。众所周知，蛋白激酶C（PKC）会迁移到细胞膜，并根据细胞内钙（CA）和二酰基甘油（DG）的浓度水平激活它，并且凝血酶是凝血因子之一，据报道是凝血因子之一，可促进骨骼肌张醇磷脂型磷脂磷脂的浓度，并促进内核细胞浓缩。因此，在具有巨核细胞MACA的MEG-01细胞中，测量了凝血酶刺激时细胞内Ca和DG的水平，并使用免疫化学技术分析了由于PKC的细胞内易位，因此由于PKC的细胞内易位而导致的膜定位变化。用0.5U/mL凝血酶刺激后，在15秒钟观察到PKC在细胞膜上的定位，在90秒时达到最高。细胞中的CA浓度在15秒内也急剧上升，在60秒时达到其最大浓度，并在10分钟后保持在该水平。 DG的水平是双相，初始上升发生在15秒内，在60秒后下降后，它再次在10分钟内保持了10分钟。然而，尽管有这些高分，但在10分钟后，PKC定位与细胞膜分离，并散布在细胞质内。在存在H7的情况下，PKC抑制剂，PKC在膜上的定位在定量和时间上都增强了，而无需改变CA或DG的浓度模式。这些结果表明，凝血酶刺激增加了细胞内CA和DG的水平，PKC转移到细胞膜，PKC激活信号转导系统进一步导致PKC的下调。