細胞増殖におけるプロテインキナ-ゼC群の機能の分子生物学的解析

蛋白激酶C基团在细胞增殖中作用的分子生物学分析

• 批准号: 02262236
• 负责人: 大野 茂男
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: Yokohama City University (1991)Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research (1990)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262236/
• 关键词: プロテインキナ-ゼC; PKC関連酵素; ホルボ-ルエステル; 転写活性化; PKC阻害剤; 細胞増殖; カルシウムイオン; 転写調節; 蛋白質リン酸化; 発癌プロモ-タ-

昨年度までに確立したcPKCα,βI,βII,γおよびnPKCδ,ε,ηに加え新規θについてもcDNA発現系を確立した。また、各分子種を識別する特異抗体を作成し、種々の組織、細胞での発現を確認した。これらを用いて、各分子種がシグナル伝達系において実際にシグナル伝達素子として機能するか否かを調べるために、ラット繊維芽細胞3Y1にcDNAを導入し、TPA応答性シス因子を介する転写活性化能を指標として各分子種の機能を検定した。その結果上記4種のcPKCに加えて4種のnPKC分子種についても転写活性化能を有すること、すなわち全でがシグナル伝達系において実際にシグナル伝達素子として機能する事が確認された。さらにこの系を用いる事により、種々の活性化因子に対する各分子種の細胞内での活性化の程度を特異的に検出することがはじめて可能となった。種々の活性化因子に対する各分子種の応答性を検討したところ、cPKC群とnPKC群とで大きな差のあることが明かとなった。すなわちTPAは全ての分子種に対して大きな活性化能をもつのに対して、生理的な血清は、予想に反してnPKC群の諸分子を選択的に活性化することが明かとなった。現在血清中の因子の同定を進めている。一方、nPKCδ,εについてはその精製に始めて成功し、これを用いてそのキナ-ゼ活性の活性化機構を検討した。その結果δがεと同様、いわゆるCaー非依存性のnPKC活性を示すこと、しかしεとは異った基質特異性、活性化因子依存性を示すことを明かにした。また種々のPKC阻害剤がcPKCと同様nPKCδ,εにも作用することを示した。

除了CPKCα，βI，βI，γ和NPKCδ，ε，η之外，还建立了去年，还为新的θ建立了一个cDNA表达系统。另外，准备特定的抗体以鉴定每个分子物种，并在各种组织和细胞中的表达得到证实。使用这些，为了确定每个分子物种在信号系统中是否实际作用是信号传导元件，将cDNA引入大鼠成纤维细胞3Y1中，并使用TPA反应性的顺式CIS因子来激活转录的能力来测试每个分子物种的功能。结果，已经证实，除了上述四种类型的CPKC外，四种类型的NPKC分子物种还具有转录激活能力，也就是说，它们实际上是信号系统中的信号传导元素。此外，通过使用该系统，首次有可能专门检测细胞中各种激活剂中每个分子物种的激活程度。当研究每个分子物种对各种激活剂的响应能力时，发现CPKC组和NPKC组之间存在显着差异。换句话说，据表明，与期望相反，TPA对所有分子物种具有较高的激活能力，而生理血清有选择地激活NPKC组的分子。目前，我们正在识别血清中的因素。另一方面，NPKCδ，首先成功纯化了，并研究了这种激活其激酶活性的方法。结果表明，像ε，δ一样，表现出所谓的CA非依赖性NPKC活性，但底物的特异性和激活因子不同。还显示出各种PKC抑制剂对NPKCδ和ε作用，类似于CPKC。

项目成果

Yoshiko Akita: "Possible role of Ca^<2+>ーindeperdent protein kinaseC isozyme,nPKCε,in thyrotropinーreleasing hormoneーstimulated signal transduction:differntial downーregulation of nPKCε in GH_4C_1 cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.172. 184-189 (1990)

Yoshiko Akita：“Ca^<2+> - 独立蛋白激酶 C 同工酶 nPKCε 在促甲状腺素释放激素刺激信号转导中的可能作用：GH_4C_1 细胞中 nPKCε 的差异下调。” 172. 184-189 (1990)

T.C.Saido,K.Mizuno,Y.Konno,S.Osada,S.Ohno and K.Suzuki.: "Purification and characterization of protein Kinase C ε(nPKC ε)from rabbit brain." Biochemistry. 31. 482-490 (1991)

T.C.Saido、K.Mizuno、Y.Konno、S.Osada、S.Ohno 和 K.Suzuki.：“兔脑中蛋白激酶 C ε (nPKC ε) 的纯化和表征。” 31. 482-490 ( 1991)

S.Ohno,Y.Akita,A.Hata,S.Osada,K.Kubo,Y.Konnno,K.Akimoto,K.Mizuno,T.Saido,T.Kuroki and K.Suzuki.: "Structural and functional diversities of a family of signal transducing protein Kinases,protein Kinase C family;two distinct classes of PKC,conventional cPKC

S.Ohno、Y.Akita、A.Hata、S.Osada、K.Kubo、Y.Konnno、K.Akimoto、K.Mizuno、T.Saido、T.Kuroki 和 K.Suzuki。：“结构和功能多样性

K.Yamaoka,S.Ohno,H.Kawasaki and K.Suzuki.: "Overexpression of A βーGaractoside binding protein causes transformation of BALB3T3 Fibroblast cells." Biochemical and Biophysical Research Communications. 179. 272-279 (1991)

K. Yamaoka、S. Ohno、H. Kawasaki 和 K. Suzuki.：“β-Garactoside 结合蛋白的过度表达导致 BALB3T3 成纤维细胞的转化。” 179. 272-279 (1991)

Yoshiko Akita: "Expression and properties of two distirct classes of the phorbor ester receptor family,four conventional protein kinaseC types and a novel protein kinaseC." J.Biol.Chem.265. 354-362 (1990)

Yoshiko Akita：“佛硼酯受体家族的两个区域类别、四种常规蛋白激酶 C 类型和一种新型蛋白激酶 C 的表达和特性。”