機能の創生を目指すオリゴヌクレオチドの化学合成

旨在创造功能的寡核苷酸的化学合成

基本信息

批准号：
03242101
负责人：
大塚栄子
金额：
$ 8.83万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03242101/
关键词：
RNA化学合成リボザイム核酸高次構造

项目摘要

1.RNAの配列と特異的切断RNAの配列特異的切断法の一つとしてRNaseHを用いる場合、ハイブリダイズさせるDNA相補鎖を4塩基とし、両端に2'ーOーメチルヌクレオチドを結合させることによって切断を限定できるが、高次構造を持つtRNAに対しては長鎖相補鎖をハイブリダイズさせることによって、効率よく反応が進行することを見出した。これを用いてtRNAの組み換えを行い、蛍光プロ-ブの導入を行った。リボザイムを用いる配列特異的切断の構造活性相関を調べるために、安定なル-プを持つハンマ-ヘッド型リボザイムを設計し、活性を調べたところ、従来のものに比べて活性が上昇することがわかった。2.バクテリオファ-ジT4RNAの自己切断部位に対応するRNAのミニル-プを化学合成し、切断部位を同定した。3.ハンマ-ヘッド型リボザイムのNMRによる構造解析ハンマ-ヘッド型リボザイムのステム部分を化学合成し、NMRによってイミノプロトンを解析することにより水素結合を証明した。必須配列中の二つのグアノシンをイノシンに置換することにより、2位のアミノ基が活性に必要なことを見出した。4.ハンマ-ヘッド型リボザイムの結晶化ハンマ-ヘッド型リボザイムのル-プ部分の三次元構造を知るためには、X線解析による構造解析が必要であるので今年度は結晶化を試み、微少結晶を得た。

1.RNA序列和特异性切割当使用RNaseH作为RNA的序列特异性切割方法之一时，待杂交的DNA互补链为4个碱基，并且2'-O-甲基核苷酸附着在两端，但可以切割。受到限制，对于具有高阶结构的 tRNA，通过杂交长互补链，反应可以有效地进行。利用这一点，我们重组了 tRNA 并引入了荧光探针。为了研究使用核酶进行序列特异性切割的结构-活性关系，我们设计了一种具有稳定环的锤头核酶并检查了其活性。我们发现，与常规核酶相比，其活性有所提高。 2.我们化学合成了与噬菌体T4RNA自裂解位点相对应的RNA小环，并鉴定了裂解位点。 3.通过NMR对锤头状核酶进行结构分析锤头状核酶的茎部分是化学合成的，通过NMR分析亚氨基质子证实了氢键键合。通过用肌苷替换基本序列中的两个鸟苷，我们发现2位上的氨基是活性所必需的。 4.锤头状核酶的结晶为了了解锤头状核酶环部分的三维结构，需要通过X射线分析来分析所获得的晶体。