チトクロームPー450の分子生物学:機能の分子機構

细胞色素 P-450 的分子生物学：功能的分子机制

基本信息

批准号：
01635004
负责人：
石村巽
金额：
$ 31.36万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)石村らはPー450cam遺伝子に部位特異的変異を導入して、カンファーの水酸化反応にはPー450camの酸素結合部位近傍にあるスレオニンー252がプロトン供与体として重要な役割を果たしていることを明らかにした(Pro.Nat.Acad.Sci.86)。一方、昨年その単離精製に成功したPー450の新しい分子種であるアルドステロン合成酵素(Pー450aldo)はNa欠食ラットの副腎球状層に著しく増加することを見出した(J,Biol.Chem,264)。2)森島ら、飯塚らは高分解能NMR、閃光分解法、更にXAFS法などを用いてP450における配位子結合とそれに伴う微細な構造変化との関係を解明した(Biochem.28 他)。3)北川らは遺伝子操作により調整したPー450ωー1の変異酵素を用いてスレオニンー301がヘム近傍にあることをFeーCO伸縮振動の測定から推測した(Biochem.28 他)。4)川戸らはPー450・CO複合体のフラッシュフオトリシス偏光解消を利用してミトコンドリア及びミクロゾーム膜中におけるPー450の回転運動を測定し、Pー450はその電子伝達成分と一時的な複合体を形成することを明らかにした(J,Biochem.107 他)。5)片桐ら、武森らはPー450llβの多様な触媒作用を明きらかにし、特にウシ副腎皮質各層ではミトコンドリア内膜レベルでPー450llβへの電子伝達が調節を受けており、球状層では電子が多重に流れて連続的な水酸化反応がおこりアルドステロンが特異的に生成されている可能性を示唆した(Biochem.Biophys.Acta.984 他)。6)岡本らは、Pー450llβのアルドステロン合成能を解明する目的でラットPー450llβのcDNAをクローン化し、その塩基配列の決定とCOS細胞内での活性発現を行った。(FEBS.Lett.255 他)7)吉田らは基質構造類似体を用いてPー450_<14DM>と基質との相互作用を系統的に解析し、反応に必須な基質の基本構造を推定した(Biochem.Biophys.Acta.1006 他)。

1）Ishimura等。在P-450CAM基因中引入了位置定向的突变，表明位于P-450CAM的氧结合位点附近的苏氨酸-252在Camphor Hydroxylation反应中起着重要的作用（Pro.nat.acad.acad.sci.86）。同时，醛固酮合酶（P-450Aldo）是一种新的P-450分子种类，去年成功分离并纯化，在Na缺失大鼠的肾上腺球状层中显着增加（J，Biol。Chem，Chem，264）。 2）Morishima等人，Iizuka等人使用高分辨率NMR，Flash光解和XAF来阐明P450中配体结合与与之相关的细胞结构变化之间的关系（Biochem.28等）。 3）Kitagawa等。据估计，苏氨酸-301使用基因工程调节的P-450Ω-1突变酶位于血红素附近（Biochem.28等）。 4）Kawado等。使用P-450-CO复合物的闪光液化去极化，以测量线粒体和微粒体膜中P-450的旋转运动，表明P-450与其电子传输成分形成了临时复合物（J，Biochem.107等）。 5）Katagiri等人，Takemori等。揭示了P-450LLβ的多种催化作用，并建议在牛肾上腺皮质的每一层的线粒体内膜水平上进行电子转移至P-450LLβ，并且电子在球状层中的多层流动在多个层中流动，从而导致了连续的羟基型甲基氢化盐（BioChemy）。 6）Okamoto及其同事克隆了大鼠P-450LLβ的cDNA，目的是阐明P-450LLβ的醛固酮合成能力，并确定碱基序列并表达COS细胞内的活性。（febs.lett.255等）7）吉田等。使用底物结构类似物，系统地分析了P-450_ <14DM>与底物之间的相互作用，并估计了反应所必需的底物的基本结构（biochem.biophys.acta.acta.1006等）。