ハイブリッドミクロスフェアの作製とその認識・分離機能の利用

杂化微球的制备及其识别分离功能的利用

基本信息

批准号：
01604593
负责人：
川口春馬
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ハイブリッドミクロスフェアとして(1)転写制御タンパク質の分離精製用アフィニティラテックスと(2)ハイドロゲル型ラテックス診断薬をとりあげた。(1)については、前年度作製できたものの機能の向上をめざし、ラテックス粒子の構造およびDNA鎖の固定法を検討した。ラテックス粒子はスチレンとグリシジルメタクリレ-ト(GMA)をソ-プフリ-乳化重合した後GMAを添加し後重合することにより、分散安定性にすぐれタンパク質の非特異吸着を受けにくいものが調製できた。前年度は粒子表面のOH基をCNBrで活性化しDNA鎖を固定する方法を採ったが、表面にエポキシ基を残した粒子を作製し直接DNAのアミン部をそこに結合することにより結合効率、結合密度を高めることができた。こうして得られたアフィニティラテックスは、細胞抽出液を予備精製することなしでその中から転写制御タンパク質E4TF3を精製することを可能にした。(2)については、ハイドロゲル粒子がタンパク質の非特異吸着を受けにくいことを利用してラテックス診断薬に適用することを試みたものである。GMA、アクリルアミド、メタクリル酸、架橋モノマ-をエダノ-ゲル溶液とし、それを沈殿重合することにより、粒径分布の狭いハイドロゲル粒子の分散液を得た。この粒子への抗体の感作は穏やかな条件下で可能であった。抗原を加えた時、この感作ラテックスはまずまずの凝集反応を示した。これらの研究の進展のため有用と考え、ラテックス粒子へのタンパク質の競争吸着や交換吸着の研究を合わせて行った。人血清γグロブリンが、ある条件下ではラテックス粒子表面に定着するのにある程度の時間を要することが確認された。

杂化微球为（1）分离和纯化转录控制蛋白和（2）水凝胶型乳胶诊断剂的亲和力乳胶。关于（1），我们研究了乳胶颗粒的结构和固定DNA链的方法，目的是改善上一年的功能。乳胶颗粒是用苯乙烯和甲基丙烯酸甲酯（GMA）聚合的肥皂 - 乳液，然后添加了GMA以进行聚合，并能够制备具有良好分散稳定性的产品，并且不太可能接受非特异性蛋白质吸附。在上一年，我们使用了一种用CNBR激活颗粒表面上的OH基团的方法来固定DNA链，但是通过在表面上创建带有环氧基的颗粒并将DNA的胺部分直接结合到层与层与层结合，从而结合结合效率和结合密度。因此获得的亲和力乳胶使得转录控制的蛋白E4TF3从细胞提取物中纯化而无需纯化。关于（2），我们试图将水凝胶颗粒应用于乳胶诊断剂，因为它们不太容易受到蛋白质非特异性吸附的影响。 GMA，丙烯酰胺，甲基丙烯酸和交联的单体用作基体 - 凝胶溶液，并获得了具有窄粒径分布的水凝胶颗粒的沉淀聚合。在轻度条件下，对该颗粒的抗体敏化。当添加抗原时，敏化的乳胶显示出像样的凝集反应。我们认为这对于这些研究的进步将很有用，并将研究蛋白质与乳胶颗粒的吸附结合在一起。已经证实，在某些条件下，人血清γ球蛋白需要一些时间才能放在乳胶颗粒的表面上。