モータードメイン以外の機能ドメインを合わせ持つミオシン分子の検索

寻找具有运动结构域以外的功能结构域的肌球蛋白分子

基本信息

批准号：
09279209
负责人：
足立博之
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09279209/
关键词：
細胞性粘菌ミオシンモータータンパク質機能ドメイン

项目摘要

細胞性粘菌の細胞は、走化性運動、貧食などアクチン細胞骨格が関与する様々な細胞運動を行い、一方、標的遺伝子破壊が容易なため、多様なミオシンモーターの生理的機能の解析に有利な生物である。本研究は、この細胞性粘菌より、未知のミオシン分子、特にモータードメイン以外の機能ドメインを合わせ持ったミオシン分子を接索してその分子及び細胞レベルでの機能を明らかにすることを目的とした。今年度はまず、ミオシンのモータードメインでよく保存された二つのアミノ酸配列(P-loopとSwitchl領域のN末端側の保存配列)をもとに設計したPCRプライマーで、細胞性粘菌ゲノムDNA又はcDNAを鋳型に増幅される断片から新奇ミオシン分子を検索した。約50クローンの配列を決定した結果、既に知られている10種の細胞性粘菌のミオシン分子に加えて、1種の新奇ミオシンが見いだされた。このミオシンについて現在までにモータードメインの配列を決定した。このミオシンはloop1と呼ばれるミオシン頭部のループが130アミノ酸もの長さに及び、その配列は細胞性粘菌の一部のクラスlミオシンの尾部に見られるATP非感受性アクチン結合部位同様Gly,Proに極端に富んだ配列になっていた。それ以外の頭部の配列は典型的なクラスlミオシンであった。このミオシン分子は、頭部に第二のアクチン結合部位を持ち、アクチンフィラメントに結合したまま滑りや力を発生させる新しいミオシン分子の可能性がある。今後、この新奇ミオシンについて尾部の配列を決定し、また、標的遺伝子破壊により細胞レベルでの機能を明らかにする一方、他の新奇ミオシン分子の検索を行う。

细胞粘液霉菌细胞进行各种涉及肌动蛋白细胞骨架的细胞运动，例如趋化运动和饮食不良，同时也能够轻松地破坏靶基因，使它们有利于分析各种肌球蛋白电机的生理功能。这项研究旨在阐明未知的肌球蛋白分子，尤其是结合了从细胞粘液霉菌的运动结构域以外的功能结构域的肌球蛋白分子，以揭示其分子和细胞功能。今年，我们首先使用基于两个基于两个氨基酸序列设计的PCR引物在肌球蛋白的运动结构域（P-lood-limop和开关区域的N末端的保守序列）设计的PCR引物，从使用细胞模具基因组DNA或cDNA进行扩增的片段中搜索新的肌球蛋白分子。测序大约50个克隆后，除了已经知道的10个细胞粘液霉菌的肌球蛋白分子外，还发现了一种新型的肌球蛋白类型。该肌球蛋白的运动域序列已确定为迄今为止。该肌球蛋白具有一个称为Loop1的环，长达130个氨基酸，其序列非常丰富，具有Gly和Pro，类似于ATP不敏感的肌动蛋白结合位点，在某些类细胞粘液菌的尾部的尾部中发现了LOP-ATP不敏感的肌动蛋白结合位点。另一个头部布置是典型的L肌球蛋白。该肌球蛋白分子在头上具有第二个肌动蛋白结合位点，并且可能是一种新的肌球蛋白分子，可产生滑动和力，同时仍与肌动蛋白丝结合。将来，将确定这种新型肌球蛋白的尾序，尽管细胞水平的功能将通过破坏靶基因来揭示，但将对其他新型肌球蛋白分子进行搜索。