モータードメイン以外の機能ドメインを合わせ持つミオシン分子の検索

寻找具有运动结构域以外的功能结构域的肌球蛋白分子

基本信息

批准号：
10175206
负责人：
足立博之
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10175206/
关键词：
モータータンパク質ミオシン機能ドメイン

项目摘要

本研究は,走化性運動,貪食など多様な細胞運動を行い,分子細胞生物学的解析に有利な細胞性粘菌より,新規のミオシン分子を検索してその分子・細胞レベルの機能を明らかにすることを目的としている。今年度は,昨年度に発見した新規ミオシンMyoKの解析を進めた。まず,MyoK遺伝子及びcDNAの全域をクローニングし,全塩基配列を決定した。推定されるアミノ酸配列から,MyoKは以下の特徴的な構造を持つことが明らかになった。第一に,MyoKは,モータードメインのloop-1領域に,これまでに見いだされたミオシンの中で最も長い142アミノ酸からなる挿入配列を持つ。この領域(GPR領域)は,極端にGlyとProに富むことから,ATP非感受性アクチン結合部位と予想されため,この配列をクラスIIミオシンの当該部位に挿入し,ATPase活性のアクチン濃度依存性を検討した結果,実際に,アクチンに対する親和性の上昇が見られた。今後,MyoKが,ATPaseサイクル中恒にアクチンと結合した状態で滑る可能性を検討する必要がある。第二に,MyoKは,軽鎖結合部位を形成するIQ配列を持たない。この特徴は,クラスXIVミオシン以外では初めて見られた。第三に,MyoKは,これまで見いだされたミオシンの中で最も短い尾部を持つ。この尾部は,正電荷に富み,細胞膜との相互作用が予想された。第四に,頭剖配列の系統樹から,MyoKは,クラスIミオシンに分類された。次に,MyoKの生理的機能を解析した。Northernブロッティングより,MyoKの転写は,発生開始2時間後に一過的に増加することがわかった。さらに,相同組換えを利用してMyoK欠損株を作成したが,少なくとも生育,発生には影響は出なかった。以上より,MyoKは,細胞性粘菌の他のクラスIミオシンと重複した生理的機能を持ち,発生段階のごく初期に働くものと予想された。

这项研究旨在寻找新型的肌球蛋白分子，并通过进行各种细胞运动（包括趋化性和吞噬作用）以及搜索细胞粘液霉菌来阐明它们的分子和细胞功能，这对于分子和细胞生物学分析是有利的。今年，我们一直在对去年发现的新肌球蛋白肌球蛋白进行分析。首先，将整个Myok基因和cDNA克隆，并确定整个碱基序列。推导的氨基酸序列表明，MYOK具有以下特征结构：首先，Myok的插入序列由142个氨基酸组成，该氨基酸是迄今为止发现的最长的肌球蛋白，在运动结构域的Loop-1区域中。该区域（GPR区域）非常富含Gly和Pro，因此预计它是ATP不敏感的肌动蛋白结合位点，并且该序列被插入II类肌球蛋白的相关位点中，并且研究了ATPase活性对肌动蛋白浓度的依赖性，实际上，观察到了ActIN的亲和力增加。有必要调查Myok在ATPase周期中可能处于肌动蛋白结合状态的可能性。其次，Myok没有形成轻链结合位点的智商序列。该功能首先在XIV级肌球蛋白外面出现。第三，Myok是有史以来发现的肌球蛋白最短的尾巴。该尾巴富含正电荷，预计将与细胞膜相互作用。第四，Myok从头部序列的系统发育树中归类为I类肌球蛋白。接下来，分析了MYOK的生理功能。 Northern印迹显示，发育发作后2小时，Myok的转录瞬时增加。此外，还使用同源重组来创建MYOK缺陷菌株，但至少它不会影响生长或发育。基于上述情况，可以预测，Myok具有与其他细胞粘液霉菌I类肌球蛋白重叠的生理功能，并且在发育阶段很早就起作用。