モータードメイン以外の機能ドメインを合わせ持つフミオシン分子の検索

寻找具有运动结构域以外的功能结构域的腐殖质蛋白分子

基本信息

批准号：
11156205
负责人：
足立博之
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11156205/
关键词：
モータータンパク質ミオシン細胞性粘菌細胞運動細胞骨格 MyoK MyoM

项目摘要

これまでの研究で、アクチン細胞骨格動態を研究するための良いモデル系である細胞性粘菌から新規のミオシン2種(MyoK,MyoM)を発見したので、平成11年度はこれをさらに発展させ、これらミオシンの細胞性粘菌の成長、分化・形態形成における生理的機能を遺伝子破壊株、過剰生産株、GFP融合蛋白質などを利用しながら明らかにすることを目的として研究を行った。MyoKに関しては、MyoKの欠損株を検討したところ、生育と分化の最終表現型に関して大きな欠陥は見られなかった。大腸菌ローン上でのプラーク拡大速度も野生株と比較して大きな違いは認められず、貪色作用の欠陥はあっても大きいものではないことが明らかになった。MyoKはクラスIミオシンに属し、他のクラスIミオシンとの機能の重複が上記の結果に結びついている可能性があるため、次年度はそれらのミオシンとの多重欠損株を作製して表現系を検討する。また、ノザン解析により、MyoKは分化のごく初期に一過的に発現が上昇することが明らかになったので、今後その時期に起こる現象への関与の検討も必要である。MyoMに関しては、欠損株及びGFP融合タンパク質の過剰生産株を作成した。欠損株はMyoKの場合と同様に欠陥が見られなかったが、GFP-MyoM高生産株では、著しい生育速度の低下が見られた。さらに、蛍光顕微鏡による解析により、GFP融合蛋白質が細胞内の小胞の膜に局在することが明らかになった。この膜は、収縮液胞または飲作用により生じるマクロピノソームである可能性があるが、次年度ではそれらのマーカータンパク質との共局在の検討によりその膜を同定するとともに、その小胞に関連したMyoMの細胞機能について検討する。

在我们之前的研究中，我们从盘基网柄菌中发现了两种新的肌球蛋白（MyoK和MyoM），这是研究肌动蛋白细胞骨架动力学的良好模型系统，我们进行了研究以阐明这些肌球蛋白在细胞生长、分化和形态发生中的生理功能。使用基因破坏菌株、过量生产菌株和 GFP 融合蛋白的盘基网柄菌。关于MyoK，当我们检查MyoK缺陷菌株时，我们发现生长和分化的最终表型没有重大缺陷。与野生型相比，大肠杆菌菌苔上的噬菌斑扩张率没有显着差异，表明吞噬功能虽然存在缺陷，但并不是主要缺陷。 MyoK属于I类肌球蛋白，其与其他I类肌球蛋白的功能重叠可能与上述结果有关。明年，我们将用这些肌球蛋白创建多个缺失菌株并检查表达系统。此外，Northern分析表明MyoK表达在分化的极早期阶段短暂增加，因此有必要研究其与这一时期发生的现象的关系。关于MyoM，创建了缺失菌株和过量产生GFP融合蛋白的菌株。尽管缺陷菌株没有像MyoK那样表现出任何缺陷，但GFP-MyoM高产菌株显示出生长速度显着下降。此外，荧光显微镜分析显示 GFP 融合蛋白定位于细胞内囊泡的膜上。该膜可能是收缩液泡或胞饮作用产生的巨胞饮体，但明年我们将通过检查其与这些标记蛋白的共定位来识别该膜，并且我们将识别该膜及其与囊泡的关联。 MyoM 的细胞功能。