ミオシン軽鎖キナーゼに新しく見つけられたアクチン連関の平滑筋収縮制御機能

新发现肌动蛋白相关平滑肌收缩控制功能的肌球蛋白轻链激酶

基本信息

批准号：
05256206
负责人：
小浜一弘
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の本報告書にはミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)がアクチンと結合することによりアクチン・ミオシン相互作用を阻害することを記した。この作用はMLCKのもつキナーゼ作用とは独立したものであって、Ca^<2+>存在下のカルモジュリン(Ca-CaM)により除去された。本年度はこのアクチン連関の阻害作用が(1)生理的に機能しうるかどうか?(2)MLCK分子のどの部位に存在するか?につき検討を加えることとした。(1)ニワトリ砂のう平滑筋よりミオシン、MLCK及びカルデスモン(CaD)を得た。昨年と同様に予めリン酸化したミオシンを用いてコートしたガラス板を用いるin vitro motility assayを行った。これによりアクチン線維の運動速度を測定するのであるが、運動が停止するのに必要なMLCKとCaDの濃度はそれぞれ1.0nMと60nMであった。一方、砂のう平滑筋ホモジェネートを30mM KClでよく洗い可溶性分画を除去し筋原線維を得た。これをSDS-PAGEにかけMLCKとCaDの比率を比較すると1:4.6〜1:8であった。(2)ニワトリ砂のう平滑筋のMLCKではN末端断片がアクチン結合能をもつことが報告されているが、我々も別な方法:CNBr処理によりこれを得た。この断片はN末の2-213残基より残り、アクチン線維と結合性を示した。この結合はCa-CaMにより阻害された。(1)で述べたin vitro motility assayでも、この断片が運動阻害を起こし、これはCa-CaMにより回復した。

在去年的报告中，我们描述了肌球蛋白轻链激酶 (MLCK) 通过与肌动蛋白结合来抑制肌动蛋白-肌球蛋白相互作用。该作用独立于MLCK的激酶作用并且在Ca 2+ 存在下被钙调蛋白(Ca-CaM)消除。今年，我们决定研究以下问题：（1）这种肌动蛋白相关的抑制作用是否能够在生理上发挥作用；（2）它存在于MLCK分子的哪个部分。 (1)从鸡砂囊平滑肌中获得肌球蛋白、MLCK和钙结合蛋白(CaD)。与去年类似，我们使用涂有预磷酸化肌球蛋白的玻璃板进行了体外运动测定。这测量了肌动蛋白纤维的运动速度，停止运动所需的 MLCK 和 CaD 浓度分别为 1.0 nM 和 60 nM。另一方面，用30mM KCl彻底洗涤砂囊平滑肌匀浆以除去可溶部分以获得肌原纤维。将其进行SDS-PAGE，比较MLCK与CaD的比例，结果为1:4.6～1:8。 (2)有报道称鸡砂囊平滑肌MLCK的N端片段具有肌动蛋白结合能力，但我们也通过不同的方法获得了这一能力：用CNBr处理。该片段保留在 N 末端残基 2-213 处，并显示出与肌动蛋白原纤维的结合能力。这种结合被 Ca-CaM 抑制。在(1)中描述的体外运动测定中，该片段也抑制运动，通过Ca-CaM恢复运动。