カルシウム感受性ミオシンをバイオチップとして利用する試み

尝试使用钙敏感肌球蛋白作为生物芯片

基本信息

批准号：
19659059
负责人：
小浜一弘
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659059/
关键词：
アクチンミオシンバイオチップカルシウム

项目摘要

研究の目的ミオシンは筋肉を構成する主要蛋白質でモーター蛋白質の代表とされ、アクチンと呼ばれる1もうひとつの筋蛋白質を動かす性質がある。この性質によって、動物細胞では筋肉収縮や細胞運動、植物細胞では原形質流動が行われている。本研究ではこの「動き」を利用してバイオチップを作成する技術を開発することを目的とするものであるが、制御の効力、ないモーター機能だけでは利用が不可能で制御のかかることが要求される。本申請はこの様な背景の元に計画されたものである。1)運搬性の形成と荷物の積載:前年度にひきつづきファッシンによりアクチン繊維を束化させ、剛性をもたした運搬体につき、移動距離とその大きさの概要を求めた。前者は5μ皿程度で今後はそれを延、長する工夫が要求される。後者は0.5μ皿程度でサイズのばらつきが多く、大きさを揃える必要がある。積載については、昨年にポリスチレンビーズを、ビオチンとアビジンのアフィニティーを介して運搬体に結合させることができた。指定した箇所へ積載は不成功のままである。ポリスチレンの他に大腸菌も同じ方式で積載することができた。2)運搬体の動きの制御:ブセビスタチンはミオシン特異的阻害薬であるが、これより速度を調節することを試みた。具体的には、ブレビスタチン非存在下でアクチン束を動かじた。ブシビスタチン存在下で速度の低下をみた。青色光照射したブレビスタチンを与えて、速度回復を観察できた。3)運搬体の方向転換:イオン集中ビームでガラス板を加工し、土手をつくりこの土手にぶつけることにした。アクチン束の剛性により方向転換を観察することができた。

研究目的肌球蛋白是构成肌肉的主要蛋白质，是代表性的运动蛋白质，具有移动另一种称为肌动蛋白的肌肉蛋白质的特性。这种特性允许动物细胞中的肌肉收缩和细胞运动，以及植物细胞中的血浆流动。这项研究的目的是开发一种利用这种“运动”来制造生物芯片的技术，但由于缺乏控制有效性，无法仅凭运动功能来使用它，需要进行控制。本申请就是在这样的背景下策划的。 1）可运输性的形成和货物的装载：继续去年，我们使用肌成束蛋白捆绑肌动蛋白纤维，并获得了刚性运输机的行驶距离和尺寸的概况。前者约为5μ板，未来需要想办法将其延长和加长。后者大约是0.5μ的培养皿，尺寸变化很大，因此需要使它们尺寸相同。至于负载，去年我们能够通过生物素和亲和素亲和力将聚苯乙烯珠子与载体结合。加载到指定位置仍然不成功。除了聚苯乙烯之外，还可以使用相同的方法加载大肠杆菌。 2）控制转运蛋白的运动：布塞维他汀是一种肌球蛋白特异性抑制剂，我们试图控制转运蛋白的运动。具体而言，肌动蛋白束在不存在肌球蛋白抑制剂的情况下被动员。在布西他汀存在下观察到速度降低。当在蓝光照射下给予肌球蛋白抑制剂时，观察到恢复速度。 3）改变载体的方向：我们决定使用集中离子束处理玻璃板，创建一个堤坝，并将载体撞入该堤坝。肌动蛋白束的硬度使我们能够观察方向的变化。

项目成果

期刊论文数量（30）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Ultrastructural change of myosin filaments in smooth muscle cell with blebbistatin

肌球他汀对平滑肌细胞肌球蛋白丝超微结构的影响

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tanaka H.;Watanabe M.;Wang H-H.;Kohama K.
通讯作者：
Kohama K.

Effect of a high-fat diet on diabetic mother rats and their offsprings and insulin signaling.

高脂肪饮食对糖尿病母鼠及其后代的影响和胰岛素信号。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nasu R.;Nakamura A.;Kakarla S.;Blough E. R.;Kohama K.;Kohama T.,
通讯作者：
Kohama T.,

Assembly and Function of Myosin II on Ultraviolet/Ozone Patterned Trimethylcholorosilane Substrates.

肌球蛋白 II 在紫外线/臭氧图案化三甲基氯硅烷基底上的组装和功能。

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J.Bionnanoscience 2
影响因子：
0
作者：
Takatsuki H.;Kolli M.;Rice K. M.;Day B. S.;Asano S.;Rahman M.;Zhamg Y.;Ishikawa R.;Kohama K.;and Blough E. R.
通讯作者：
and Blough E. R.

Sliding of F-actin on myosin II under the conditions fully saturated with variety of actin-binding proteins.

在各种肌动蛋白结合蛋白完全饱和的条件下，F-肌动蛋白在肌球蛋白 II 上滑动。