血管内皮細胞におけるエンドセリン-1の産生機構

血管内皮细胞内皮素1的产生机制

基本信息

批准号：
04263237
负责人：
森本史郎
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Osaka University of Pharmaceutical Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.培養血管内皮細胞を用いた実験培養ブタ血管内皮細胞の膜分画とbigET-3を反応させると、顕著なimmunoreactive(IR)-ET量の増加が認められ、フォスフォラミドン(10^<-4>M)はこのIR-ETの増加をほぼ完全に阻害した。反応溶液の逆相HPLCを行ったところ、合成ET-3の溶出位置に一致する分画にET免疫活性ピークが認められた。次に膜分画を可溶化して可溶化成分のゲル濾過を行い、各溶出分画のbigET-3変換活性を測定すると、分子量約300kDaに相当する分画に変換活性ビークが認められ、この溶出パターンはbigET-1変換活性のそれと一致した。フォスフォラミドンは、これら両変換活性をほぼ完全に阻害した。無傷の培養血管内皮細胞にbigET-3を添加すると、ET-3への変換がみられ、この外因性bigET-3の変換もフォスフォラミドンにより有意に抑制された。2.培養血管平滑筋細胞を用いた実験培養ブタ血管平滑筋細胞から膜分画を調製し酵素試料とした。本分画にもフォスフォラミドン感受性のbigET-3変換活性が認められた。本分画のbigET-1変換活性は、反応液にbigET-3が存在する場合、有意に低下した。したがって、本分画のbigET-1及びbigET-3変換活性は同一酵素によるものと考えられた。3.麻酔ラットを用いた実験節遮断された体重約300gのSD系雄性ラットにbigET-3(3nmo1/kg)を投与すると、特続的な血圧上昇反応がみられ(最大反応:約20mmHg)、この昇圧反応は、フォスフォラミドン(5mg/kgi.v.)を前処置することにより有意に抑制された。一方、同用量のフォスフォラミドンは、ET-3の昇圧反応に影響を与えなかった。

1。基于文化培养的基于猪的内皮细胞，内皮细胞和biget-3的反应将显示出明显增加的Imunoreactive（ir）-ET量和Fosforamidon（10^<< -4> m）几乎完全增加抑制此IR-ET的增加。当执行反应溶液的相对相HPLC时，在与合成ET-3的放升位置相匹配的分裂中观察到ET免疫活性峰。接下来，当膜部分被求解以执行溶解成分的凝胶过滤，并测量每个洗脱液的biget-3转换活性时，观察到与分子量相对应的分裂喙，观察到了约300 kDa的分子量。模仿模式与Biget-1转换活动相匹配。 Fosforamidon几乎完全抑制了这些转化活性。当将BIGET-3添加到完整的培养培养基血管内皮细胞中时，观察到ET-3的转化，并且该外部BIGET-3的转化受到formaniDon的抑制作用。 2。培养的血管平滑肌细胞是由实验培养的猪LED血Vaba平滑肌细胞制备的膜分裂，并用作酶样品。在该分裂中还观察到了Fosforamidon敏感性的BIGET-3转化活性。当反应溶液中存在BIGET-3时，该分裂中的BIGET-1转化活性显着降低。因此，该分裂的BIGET-1和BIGET-3转换活性被认为是由于相同的酶。 3。实验大鼠用于将BIGET-3（3NMO1/kg）施加到基于SD的大鼠，重量约为300G，并且观察到特殊的血压升高反应（最大反应：约20 mmHg） Fosforamidon（5mg/kgi.v。）的预处理可显着抑制压力反应。另一方面，相同的剂量fosforamidon不会影响ET-3升高反应。