レニン分泌細胞の機能に関する生理,生化学的研究

肾素分泌细胞功能的生理生化研究

基本信息

批准号：
61571072
负责人：
森本史郎
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University of Pharmaceutical Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61571072/
关键词：
傍糸球体細胞レニン分秘カルシウムカルモデュリン

项目摘要

ラット腎皮質初代培養細胞を用いてレニン遊離におよぼすアドレナリンα-作動薬並びにCa-作動薬の影響について検討した。体重約80gのWistar系雄性ラットの両腎を、灌流,洗滌した後、その腎皮質を細切した。次いで0.25%トリプシン液を用いて細胞を分散させ、遠心、洗滌操作を繰り返した。得られた腎皮質細胞がトリパンブルー排除試験陰性であることを確認した後、これをPercall密度勾配上に重層し、遠心分離後、レニン活性の最も高い分画を分取した。本分画を10%牛胎児血清を含むRPM11640培地に加え、48時間5%【CO_2】下培養した後、実験に供した。分取した細胞のレニン活性は、約50ng angiotensin【I】/hr/【10^4】cellsであった。これらの細胞を培養した場合、培養3日目まで、レニン活性は顕著に増大したが、以後は徐々に低下した。培養48時間後の細胞懸濁液に【10^(-8)】〜【10^(-4)】MのノルエピネフリンあるいはBay K8644を添加すると、メジウム中へのレニン遊離は薬物濃度の増加に応じて減少した。このレニン遊離減少作用は、Ca拮抗薬及びカルモデュリン阻害薬の添加により消失した。上記の作用は、実験材料として腎皮質切片を用いた場合にも認められた。従来より、単離灌流腎や腎皮質切片を用いて、レニン遊離と細胞内Ca濃度の間に負の相関性があることが提案されてきた。レニン分秘細胞を豊富に含む腎皮質初代培養系を用いた本実験結果は、上の仮説を強く支持するものである。なお、細胞内遊離Ca濃度の測定については、現在検討中である。

使用原代培养的大鼠肾皮质细胞研究肾上腺素能α-激动剂和Ca-激动剂对肾素释放的影响。将体重约80g的雄性Wistar大鼠双肾灌注、清洗，将肾皮质切成小片。接下来，使用0.25%胰蛋白酶溶液分散细胞，并重复离心和洗涤操作。确认所得肾皮质细胞在台盼蓝排除试验中呈阴性后，将其在Percall密度梯度上分层，离心后收集肾素活性最高的级分。将该级分加入含有10%胎牛血清的RPM11640培养基中，在5%[CO_2]下培养48小时，然后用于实验。分选细胞的肾素活性约为 50 ng 血管紧张素 [I]/hr/[10^4] 个细胞。当培养这些细胞时，肾素活性显着增加，直到培养第三天，但随后逐渐下降。当培养48小时后向细胞悬液中添加[10^(-8)]至[10^(-4)]M去甲肾上腺素或Bay K8644时，随着药物浓度的增加，释放到培养基中的肾素减少。添加 Ca 拮抗剂和钙调蛋白抑制剂可以消除这种减少肾素释放的作用。当使用肾皮质切片作为实验材料时也观察到上述效果。先前使用分离的灌注肾脏和肾皮质切片提出肾素释放和细胞内 Ca 浓度之间存在负相关。本实验使用富含肾素分泌细胞的肾皮质原代培养系统，结果有力地支持了上述假设。目前正在考虑测量细胞内游离钙浓度。