スフィンゴ脂質活性化蛋白質前駆体による神経細胞の分化誘導

鞘脂激活蛋白前体诱导神经元分化

基本信息

批准号：
04250206
负责人：
柿本泰男
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04250206/
关键词：
Saposin-C アミノ酸配列保護蛋白質保護作用 Prosaposin 分布

项目摘要

糖脂質の代謝にかかわる種々の水解酵素の活性制御には活性化蛋白質が関与している。Saposin-Cはリソゾーム性β-グルコシダーゼ活性化能を持つ活性化蛋白質であるが、我々はまずこの蛋白質をウシ脾臓から精製し全アミノ酸配瞬を決定し、活性化蛋白質の部分断片化の実験結果から、活性化蛋白質分子内で35番残基周辺が酵素グルコセレブロシダーゼとの相互作用に重要な部位であることを証明した(Biochim.Biophys.Acta 1120,75-80)。またヒト保護蛋白質発言されたcDNAのstable transformantで発現された保護蛋白質がエステラーゼ活性とカルボキシペプチダーゼ活性を合わせ持ちβ-ガラクトシダーゼと複合体を形成することを明らかにし、またこれらの活性がsaposinによって保護されることを証明した(J.Biol.Chem.268,1180-1186)。Saposin-Cに対する抗体を作成し、saposin前駆体であるProsaposinのラット脳における分布を検討した。部位別のウェスタンブロットにおいて、prosaposinは海馬、脳幹、小脳、線状体、視床下部に豊富に存在し、成熟型saposinはどの部位においても検出されなかった。免疫組織化学的手法による結果は同様に、皮質下に多くの反応が見られた。免疫反応は神経細胞体および線維に見られ、グリア細胞には観察されなかった。部位的にはコリン作動性ニューロンが多いとされる神経核に反応が強く見られ、それらの神経核が投射する部位において、神経線維が陽性に染色された。中枢神経系では、前駆体のprosaposinとしてそのほとんどが存在し、神経細胞体において合成され、軸索内をターミナルへの運ばれることが考えられた(J.Comp.Neurol.in press)。

激活蛋白参与控制参与糖脂代谢的各种水解酶的活性。 Saposin-C是一种具有激活溶酶体β-葡萄糖苷酶能力的激活蛋白。我们首先从牛脾中纯化了该蛋白，测定了完整的氨基酸组成，并获得了该激活蛋白部分片段化的实验结果。活化蛋白分子中残基 35 周围的区域是与葡萄糖脑苷脂酶相互作用的重要位点 (Biochim. Biophys. Acta 1120，75-80）。我们还发现，在 cDNA 稳定转化体中表达的人类保护蛋白具有酯酶和羧肽酶活性，并与 β-半乳糖苷酶形成复合物，并且这些活性受到 saposin 的保护 (J.Biol.Chem.268, 1180-1186)。）。我们创建了一种针对 Saposin-C 的抗体，并研究了 Saposin（一种 Saposin 前体）在大鼠大脑中的分布。在区域Western印迹分析中，prosaposin大量存在于海马、脑干、小脑、纹状体和下丘脑中，并且在任何区域均未检测到成熟的saposin。免疫组织化学结果类似地表明，在皮质下区域观察到许多反应。在神经元细胞体和纤维中观察到免疫反应性，但在神经胶质细胞中未观察到。局部观察到，据说有很多胆碱能神经元的神经核发生了强烈的反应，在这些神经核投射的区域，神经纤维被染色呈阳性。在中枢神经系统中，大部分以前体前塞蛋白的形式存在，在神经元细胞体内合成并转运至轴突末端（J.Comp.Neurol.in press）。