細胞複製制御の遺伝子発現

控制细胞复制的基因表达

• 批准号: 03261104
• 负责人: 花岡 文雄
• 金额: $ 35.71万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03261104/
• 关键词: 細胞周期; RNAポリメラ-ゼ; EIA遺伝子; c‐mos遺伝子; c‐myc産物; CDC28キナ-ゼ; 有性生殖

研究代表者および研究分担者の本年度の研究実績は以下の通りである。哺乳類細胞の遺伝子導入実験における選択マ-カ-として、新しい薬剤耐性遺伝子(bsr)が有用であることを見出した(花岡)。増殖相の異なる各時期のRNAポリメラ-ゼの存在様式を解析し、増殖を停止した静止定常期大腸菌から、3形態のRNAポリメラ-ゼを同定した(石浜)。ゲノム中の差異のある未知の部分を選択的にクロ-ニングするin gel competitive reassociation法を改良した(大石)。デキサメタゾン処理によりアデノ2型E1A遺伝子12ScDNAを発現するラット細胞を用い、高レベルE1AがG1/S境界をバイパスさせることを示した(小田)。HepG2細胞にSV40T抗原発現プラスミドとc‐myc遺伝子のプロモ-タ-上流域にCAT遺伝子を接続したものをコトランスフェクションし、CATの発現が、上流領域に依存してトランス活性化されることを明らかにした(小池)。精製したSpoOA蛋白質を用い、SpoOAはセンサ-蛋白質KinAによってリン酸化され、このリン酸化されたSpoOA蛋白質が、spoOF遺伝子の転写を促進することを見出した(小林)。c‐mos産物の安定性と生理活性の制御にN末端アミノ酸のわずか数個が重要であることを示した(佐方)。tsBN63変異を相補するヒト遺伝子はリボゾ-ムタンパクS4をコ-ドすることが判明した(西本)。ショウジュウバエのpol.α.PCNAの両遺伝子に共通する転写促進配列と、そこに結合する共通のタンパク質因子を見出した(松影)。酵母の細胞周期G1/S期を制御するCDC28キナ-ゼの機能を相補するヒト遺伝子CDK2を分離した(松本)。ste11遺伝子産物が、有性生殖に関わる遺伝子群の上流に共通に存在するTTCTTTGTTYという配列を認識する転写調節因子であることが判明した(山本)。

本年度主要研究者和共同研究者的研究成果如下。我们发现一种新的耐药基因 (bsr) 可用作哺乳动物细胞基因转移实验 (Hanaoka) 中的选择标记。我们分析了不同生长阶段 RNA 聚合酶的存在，并从已停止生长的静止大肠杆菌 (Ishihama) 中鉴定出三种形式的 RNA 聚合酶。我们改进了凝胶内竞争性重关联方法，用于选择性克隆基因组的未知部分和不同部分（Oishi）。在表达腺型 2 E1A 基因 12ScDNA 的大鼠细胞中使用地塞米松处理，我们发现高水平的 E1A 绕过了 G1/S 边界 (Oda)。我们用SV40T抗原表达质粒和连接至c-myc基因启动子上游区域的CAT基因共转染HepG2细胞，并证实CAT表达根据上游区域而反式激活(Koike)。使用纯化的SpoOA蛋白，我们发现SpoOA被传感器蛋白KinA磷酸化，并且这种磷酸化的SpoOA蛋白促进spoOF基因的转录（Kobayashi）。结果表明，仅有少数 N 端氨基酸对于控制 c-mos 产品 (Sakata) 的稳定性和生理活性非常重要。发现补充 tsBN63 突变的人类基因编码核糖体蛋白 S4 (Nishimoto)。我们发现了果蝇 pol.α.PCNA 基因共有的转录启动子序列以及与其结合的常见蛋白因子 (Matsukage)。我们分离出了人类基因 CDK2，它补充了 CDC28 激酶的功能，CDC28 激酶控制酵母细胞周期的 G1/S 期 (Matsumoto)。 ste11 基因产物被发现是一种转录调节因子，可识别序列 TTCTTTGTTY，该序列通常存在于有性生殖相关基因的上游 (Yamamoto)。

项目成果

F.Hirose: "Structure and expression during development of Drosophila melanogaster gene for DNA polymerase α" Nucl.Acids Res.19. 4991-4998 (1991)

F.Hirose：“果蝇 DNA 聚合酶 α 基因发育过程中的结构和表达”Nucl.Acids Res.19（1991）。

Y.Iino: "S.pombe pacl^+,whose overexpression inhibits sexual development,encodes a ribonuclease IIIーlike RNase" EMBO J.10. 221-226 (1991)

Y.Iino：“S.pombe pacl^+，其过度表达抑制性发育，编码核糖核酸酶 III 样 RNase”EMBO J.10 (1991)。

M.Izumi: "Blasticidin Sーresistance gene(bsr):anovel selectable marker for mammalian cells" Exp.Cell Res.197. 229-233 (1991)

M.Izumi：“杀稻瘟菌素 S 抗性基因（bsr）：哺乳动物细胞的新型选择标记”Exp.Cell Res.197（1991）。

K.Irie: "SGV1 encodes a CDC28/cdc2ーrelated kinase required for a Gα subunitーmediated adaptive response to pheromone in S.cerevisiae" Cell. 65. 785-795 (1991)

K. Irie：“SGV1 编码酿酒酵母中 Gα 亚基介导的信息素适应性反应所需的 CDC28/cdc2 相关激酶”，Cell 65. 785-795 (1991)。

K.Igarashi: "Bipartite functional map of the E.coli RNA polymerase α subunit:Involvement of the Cーterminal region in transcription activation by cANPーCRP" Cell. 65. 1015-1022 (1991)

K.Igarashi：“大肠杆菌 RNA 聚合酶 α 亚基的二分功能图：C 末端区域参与 cANP-CRP 的转录激活”细胞。 65. 1015-1022 (1991)