分離核系を用いた真核細胞の転写ー修復および複製修復共役反応の解析

使用分离的核系统分析真核细胞中的偶联转录修复和复制修复反应

• 批准号: 10878119
• 负责人: 花岡 文雄
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878119/
• 关键词: 転写; 修復; 複製; 分離核系; 紫外線; 色素性乾皮症; コケイン症候群; RNAポリメラーゼ

研究代表者および研究分担者は、真核細胞における転写と修復、および複製と修復の各共役反応の分離核系の構築とその解析を目指して、以下に述べる研究を行った。1) 培養細胞に紫外線を照射後、細胞から核を単離し、RNAポリメラーゼI(アクチノマイシンD感受性)及びII(αアマニチン感受性)によるRNA合成を、[α-^<32>P]UTPの取り込みによりそれぞれ測定する系を確立した。2) 1)で述べた分離核系をHeLa細胞、XP-C群細胞、CS-B群細胞に適用し、RNA合成に対する紫外線照射の影響を調べた。その結果、RNAポリメラーゼIによるRNA合成は、CS-B群細胞核では、HeLa細胞及びXP-C群細胞核に比べ、紫外線照射により強く阻害された。またRNAポリメラーゼIIによるRNA合成は、HeLa細胞及びXP-C群細胞核では紫外線による影響はほとんど見られなかったが、CS-B群細胞核では、紫外線照射によりRNAポリメラーゼIによるRNA合成よりもさらに著しい阻害が見られた。3) 複製と修復の共役反応については、SV40ウイルスのオリジンを有するプラスミドにリーディング鎖側あるいはラギング鎖側にそれぞれ1カ所損傷を持たせたものを鋳型として、複製と修復を共役させる試みを始めた。HeLa細胞抽出液を用いた無細胞系においては、損傷が乗り越えられること、一方、XP-V群細胞からの細胞抽出液では、少なくともピリミジンダイマーを有する鋳型では、それを乗り越えることが出来ないことを認めた。

研究人员和研究人员进行了以下研究，目的是构建和分析真核细胞中的转录，修复和复制的孤立核系统，以及为每个复制和修复的每个共轭反应的单独核系统的构建和分析。 1）在用紫外线射线照射培养细胞后，从细胞中分离核，并建立系统以测量通过RNA聚合酶I（放线菌素D敏感性）和II（α-氨基氨酸敏感性）通过摄取[α-^<32> p] UTP的II（α-氨基氨酸敏感性）的RNA合成。 2）在1）中描述的分离的核系统应用于HeLa细胞，XP-C组和CS-B组细胞，并研究了紫外线照射对RNA合成的影响。结果，与HELA细胞和XP-C组细胞核相比，紫外线辐射由RNA聚合酶I的RNA合成在CS-B组细胞核中被严重抑制。此外，RNA聚合酶II的RNA合成几乎不会受到HeLa细胞和XP-C组细胞核的紫外线的影响，但是紫外线辐射显示出比RNA聚合酶I的RNA合成的抑制更大。病毒是作为模板在领先或滞后链侧的一个地方损坏的。发现使用HeLa细胞提取物可以在无细胞系统中克服损伤，而在至少具有嘧啶二聚体的模板中，无法克服来自XP-V组细胞的细胞提取物。

项目成果

Kai,M.: "A new Drosophila ultraviolet light-damaged DNA recognition endonuclease that selectively nicks a(6-4)photoproduct site." Biochin.Biophys.Acta. 1397. 180-188 (1998)

Kai,M.：“一种新的果蝇紫外线损伤 DNA 识别核酸内切酶，可选择性地切割 (6-4) 光产物位点。”