てんかんマウス脳における遺伝子発現調節機構の研究

癫痫小鼠脑基因表达调控机制研究

基本信息

批准号：
03670571
负责人：
川北幸男
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670571/
关键词：
Elマウス RNAポリメラ-ゼ転写蛋白質キナ-ゼけいれんてんかん発作 mRNA

项目摘要

先天性痙攣素因を有するElマウス脳について、メッセンジャ-RNAの転写に関与するRNAポリメラ-ゼとこの酵素のリン酸化を触媒する蛋白質キナ-ゼとについて検討した。脳より分離した細胞核を超音波処理し、クロマチン蛋白質を可溶化した。遠心により分離した上清を硫安処理して調製した分画を2分し、一方をDEAEセフアデックス・カラムを通し、RNAポリメラ-ゼを調製した。他方はホスホセルロ-ズ・カラムを用いて、蛋白質キナ-ゼを部分的に精製した。1)RNAポリメラ-ゼの活性は、痙攣履歴のあるEl(+)と履歴のないEl(o)マウスとがともにddyマウスより有意に高かった。同様に、蛋白質キナ-ゼの活性もElマウスがddyマウスより高い活性を示した。2)発育期において、生後14日ではRNAポリメラ-ゼと蛋白質キナ-ゼがともにddyマウスより有意な低値を示したが、生後21日以後では、逆にElマウスがddyマウスよりも高値となった。蛋白質キナ-ゼの活性は、生後21日と28日とで、Elとddyマウスとの間で有意差は認められなかったが、生後56日以後では、再びElマウスがddyマウスより低値となった。履歴獲得以前の生後14日の活性の差は、遺伝的素質によるものと推測される。3)生後100日のElマウスにおける放り上げ刺激による発作では、RNAポリメラ-ゼ活性の低下は発作30分後で最大となるが、蛋白質キナ-ゼの活性はそれより早く、発作直前に最大の低下を示した。発作30分後におけるRNAポリメラ-ゼ画分に、発作間歇期の蛋白質キナ-ゼ画分を加えた場合、RNAポリメラ-ゼの活性は発作間歇期のレベルまで回復を示した。このことは、Elマウス脳のRNAポリメラ-ゼ活性の低下が、蛋白質キナ-ゼによるリン酸化によって増加し、正常まで回復することを示唆している。

我们研究了 El 小鼠大脑中参与信使 RNA 转录的 RNA 聚合酶和催化该酶磷酸化的蛋白激酶，这些小鼠具有先天性抽搐倾向。对从大脑中分离出的细胞核进行超声处理以溶解染色质蛋白。将离心分离的上清液用硫酸铵处理，将级分分成两份，一份通过DEAE Sephadex柱以制备RNA聚合酶。另一方面，使用磷酸纤维素柱部分纯化蛋白激酶。 1) 有癫痫病史的 El(+) 小鼠和无癫痫病史的 El(o) 小鼠的 RNA 聚合酶活性均显着高于 ddy 小鼠。类似地，El小鼠表现出比Ddy小鼠更高的蛋白激酶活性。 2）发育时期，RNA聚合酶和蛋白激酶在出生后第14天均表现出明显低于ddy小鼠的值，但相反，出生后21天后，El小鼠表现出高于ddy小鼠的值。成为。出生后第21天和第28天，El和ddy小鼠的蛋白激酶活性没有显着差异，但出生后56天，El小鼠的水平再次低于ddy小鼠。出生后前 14 天（在获得病史之前）的活动差异被认为是由于遗传倾向造成的。 3)在100天龄的El小鼠中，RNA聚合酶活性的降低在癫痫发作后30分钟达到最大值，但蛋白激酶活性在癫痫发作前达到最大值。当将发作间期蛋白激酶级分加入到癫痫发作后30分钟获得的RNA聚合酶级分中时，RNA聚合酶活性恢复到发作间期的水平。这表明El小鼠大脑中RNA聚合酶活性的降低通过蛋白激酶的磷酸化而增加并恢复到正常。