てんかんマウス脳における遺伝子発現調節機構の研究

癫痫小鼠脑基因表达调控机制研究

基本信息

批准号：
03670571
负责人：
川北幸男
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670571/
关键词：
Elマウス RNAポリメラ-ゼ転写蛋白質キナ-ゼけいれんてんかん発作 mRNA

项目摘要

先天性痙攣素因を有するElマウス脳について、メッセンジャ-RNAの転写に関与するRNAポリメラ-ゼとこの酵素のリン酸化を触媒する蛋白質キナ-ゼとについて検討した。脳より分離した細胞核を超音波処理し、クロマチン蛋白質を可溶化した。遠心により分離した上清を硫安処理して調製した分画を2分し、一方をDEAEセフアデックス・カラムを通し、RNAポリメラ-ゼを調製した。他方はホスホセルロ-ズ・カラムを用いて、蛋白質キナ-ゼを部分的に精製した。1)RNAポリメラ-ゼの活性は、痙攣履歴のあるEl(+)と履歴のないEl(o)マウスとがともにddyマウスより有意に高かった。同様に、蛋白質キナ-ゼの活性もElマウスがddyマウスより高い活性を示した。2)発育期において、生後14日ではRNAポリメラ-ゼと蛋白質キナ-ゼがともにddyマウスより有意な低値を示したが、生後21日以後では、逆にElマウスがddyマウスよりも高値となった。蛋白質キナ-ゼの活性は、生後21日と28日とで、Elとddyマウスとの間で有意差は認められなかったが、生後56日以後では、再びElマウスがddyマウスより低値となった。履歴獲得以前の生後14日の活性の差は、遺伝的素質によるものと推測される。3)生後100日のElマウスにおける放り上げ刺激による発作では、RNAポリメラ-ゼ活性の低下は発作30分後で最大となるが、蛋白質キナ-ゼの活性はそれより早く、発作直前に最大の低下を示した。発作30分後におけるRNAポリメラ-ゼ画分に、発作間歇期の蛋白質キナ-ゼ画分を加えた場合、RNAポリメラ-ゼの活性は発作間歇期のレベルまで回復を示した。このことは、Elマウス脳のRNAポリメラ-ゼ活性の低下が、蛋白質キナ-ゼによるリン酸化によって増加し、正常まで回復することを示唆している。

在El小鼠的大脑中，先天性抽搐倾向，我们研究了参与信使RNA转录的RNA聚合酶和催化该酶磷酸化的蛋白质喹啉酶。将与大脑分离的细胞核进行超声处理以溶解染色质蛋白。通过离心剂制备的馏分通过硫酸铵处理分为两个分数，其中一个通过DEAE CEF ADEX柱进行了准备，以制备RNA聚合酶。另一方面，使用磷酸纤维素柱部分纯化蛋白质喹啉酶。 1）在EL（+）中，RNA聚合酶的活性都明显高，而没有病史的EL（+）和没有病史的EL（O）小鼠。类似地，蛋白喹酶活性在EL小鼠中的活性也比DDY小鼠更高。 2）在发育阶段，RNA聚合酶和蛋白质喹啉酶都显着低于出生后14天的DDY小鼠，但出生后21天后，EL小鼠实际上高于DDY小鼠的小鼠。在出生后第21至28天之间，EL和DDY小鼠之间蛋白质喹啉酶的活性并没有显着差异，但是56天后，EL小鼠再次低于DDY小鼠。据推测，历史获取前14天的活动差异是由于遗传能力引起的。 3）在由100天老年小鼠刺激引起的癫痫发作中，癫痫发作后30分钟最大化RNA聚合酶活性的降低，但蛋白质喹啉的活性更快，并且在癫痫发作前显示最大降低。当癫痫发作后30分钟，将透氧酶周期的蛋白质喹啉酶分数添加到RNA聚合酶分数中时，RNA聚合酶的活性恢复为射丝周期水平。这表明EL小鼠大脑中RNA聚合酶活性的降低会通过蛋白喹啉酶磷酸化而增加，并恢复到正常。