シトクロムP450camオペロン・リプレッサ-(CamR蛋白質)の構造と機能解析

细胞色素 P450cam 操纵子阻遏蛋白（CamR 蛋白）的结构和功能分析

基本信息

批准号：
03259213
负责人：
堀内忠郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シトクロムPー450camオペロン(camDCAB)・リプレッサ-(CamR蛋白質)について,以下の研究成果を得た。1.CamR蛋白質の多量生産株を作製し,この菌から,硫安分画,DE52クロマトグラフィ-およびゲル濾過により,総蛋白量の2%の収量で純粋なCamR蛋白質を得た。2.CamR蛋白質は,サブユニットの分子量が約20,000のホモダイマ-構造を持ち,その等電点は約5.8である。CamR蛋白質のオペレ-タ-DNAへの結合の解離定数は5x10^<-8>Mで,誘導物質(カンファ-)により結合能を朱った。その際,CD差スペクトルによれば,カンファ-の結合により,CD差スペクトルによれば,カンファ-の結合により,CamR蛋白質の二次構造はαーヘリックスの含量が約10%減少し,βーシ-トも少し減少した。3.カンファ-のみならず,その代謝物産である5ーエクソーヒドロキシカンファ-,2,5ージケトーカンファンとノンカンファ-およびアダマンタンが,CamR蛋白質に結合する。4.本研究班の協力(兵庫教育大・白木原康雄博士)により,CamR蛋白質の結晶化を研究中であり,この蛋白質が結晶化されやすいとの結果が得られた。また,DNAが結合したCamR蛋白質の結晶化についても検討中である。5.CamR蛋白質のオペレ-タ-と基質の結合部位のアミノ酸配列について検討するため,変異CamR蛋白質を作製中である。6.camR遺伝子とcamDCAB遺伝子群は,お互いに逆向きで,リプレッサ-により同時に抑制されることを確認した。CamR蛋白質をコ-ドするcamR遺伝子の転写開始点を決定した。そのプロモ-タ-活性は,シトクロムPー450camオペロンのそれの約1/5である。

Cithrome P-450CAM操纵子（CAMDCAB）和Replessa（CAMR蛋白）已获得以下研究结果。 1。产生CAMR蛋白的高量产生菌株，并通过硫形，DE52色谱和凝胶过滤从总蛋白质体积的2％获得总蛋白质量的2％获得。 2. CAMR蛋白具有一个HOMO DIGA结构，其亚单位分子量约为20,000，而同等的分子量约为5.8。与CAMR蛋白操作-TA-DNA结合的解剖常数为5x10^<-8> m，并且结合能力（功夫）被变红。当时，根据CD差异，根据功夫HA的组合，根据CD差异，CAMR蛋白的二级结构减少了约10％的CAMR蛋白含量。小的。 3。不仅功夫HA，还包括代谢产物，5- eexaw hydroxikanfa-，2,5 Giketeau Convens，Non-Kamphe和Adamantan与CAMR蛋白结合。 4。该研究团队的合作（Yasuo Shiragihara博士，Hyogo教育大学）一直在研究CAMR蛋白的结晶，并获得了该蛋白可能会结晶的。我们还考虑了DNA结合的CAMR蛋白的结晶。 5。为了检查CAMR蛋白算子和底物之间结合位点的氨基酸序列，我们正在准备一种奇怪的CAMR蛋白。 6。证实了CAMR基因和CAMDCAB基因群相反，并被Repressa同时抑制。确定了覆盖CAMR蛋白的CAMR基因转移的起点。促销-TA活动约为Collome P-450CAM操纵子的1/5。