シトクロムP450camオペロン・リプレッサ-(CamR蛋白質)の構造と機能解析

细胞色素 P450cam 操纵子阻遏蛋白（CamR 蛋白）的结构和功能分析

基本信息

批准号：
03259213
负责人：
堀内忠郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シトクロムPー450camオペロン(camDCAB)・リプレッサ-(CamR蛋白質)について,以下の研究成果を得た。1.CamR蛋白質の多量生産株を作製し,この菌から,硫安分画,DE52クロマトグラフィ-およびゲル濾過により,総蛋白量の2%の収量で純粋なCamR蛋白質を得た。2.CamR蛋白質は,サブユニットの分子量が約20,000のホモダイマ-構造を持ち,その等電点は約5.8である。CamR蛋白質のオペレ-タ-DNAへの結合の解離定数は5x10^<-8>Mで,誘導物質(カンファ-)により結合能を朱った。その際,CD差スペクトルによれば,カンファ-の結合により,CD差スペクトルによれば,カンファ-の結合により,CamR蛋白質の二次構造はαーヘリックスの含量が約10%減少し,βーシ-トも少し減少した。3.カンファ-のみならず,その代謝物産である5ーエクソーヒドロキシカンファ-,2,5ージケトーカンファンとノンカンファ-およびアダマンタンが,CamR蛋白質に結合する。4.本研究班の協力(兵庫教育大・白木原康雄博士)により,CamR蛋白質の結晶化を研究中であり,この蛋白質が結晶化されやすいとの結果が得られた。また,DNAが結合したCamR蛋白質の結晶化についても検討中である。5.CamR蛋白質のオペレ-タ-と基質の結合部位のアミノ酸配列について検討するため,変異CamR蛋白質を作製中である。6.camR遺伝子とcamDCAB遺伝子群は,お互いに逆向きで,リプレッサ-により同時に抑制されることを確認した。CamR蛋白質をコ-ドするcamR遺伝子の転写開始点を決定した。そのプロモ-タ-活性は,シトクロムPー450camオペロンのそれの約1/5である。

对于细胞色素P-450CAM操纵子（CAMDCAB）和阻遏物（CAMR蛋白），获得了以下研究结果。 1。从该细菌制备了大规模的CAMR蛋白，并通过硫酸铵馏分，DE52色谱和凝胶过滤以总蛋白质含量的2％获得纯CAMR蛋白。 2。CAMR蛋白具有一个本质的结构，分子量约为20,000个亚基，其等电点约为5.8。 CAMR蛋白与算子DNA的结合的解离常数为5x10^<-8> m，并且通过诱导剂（会议）验证结合能力。目前，根据CD差异光谱，由于会议的结合，并且根据CD差异谱，CAMR蛋白二级结构的α-螺旋的含量减少了约10％，并且β-螺旋的含量也因会议的结合而略微降低。 3。不仅会议，而且它的代谢产物，即5-EXO羟基苯甲酰 - ，2,5-二酮甘脉 - 和非 - 甲状腺斑和非甲虫和非甲烷和阿甘坦烷，与CAMR蛋白结合。 4。在该研究团队的合作（Shirakihara Yasuo，Hyogo教育大学），我们目前正在研究CAMR蛋白的结晶，并且我们获得了这种蛋白质易于结晶的结果。此外，也正在研究DNA结合的CAMR蛋白的结晶。 5。为了研究CAMR蛋白算子和底物的结合位点的氨基酸序列，目前正在制备突变体CAMR蛋白。 6。证实CAMR基因和CAMDCAB基因组朝相反的方向，并被阻遏物同时抑制。确定了编码CAMR蛋白的CAMR基因的转录起源。它的启动子活性约为细胞色素P-450CAM操纵子的启动子活性。