大腸菌F因子の細胞分裂誘導蛋白質・抑制蛋白質の構造と機能

大肠杆菌F因子细胞分裂诱导蛋白和抑制蛋白的结构与功能

基本信息

批准号：
62570991
负责人：
堀内忠郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570991/
关键词：
大腸菌 Fプラスミド細胞分裂 letD遺伝子 tdiF遺伝子 LetD蛋白質

项目摘要

大腸菌の細胞分裂開始の誘導機構を分子レベルで明らかにすることを目的として本研究を行った. 大腸菌においては, 細胞分裂の開始には染色体DNA複製が終了することが必要である. 同様に, ある種のプラスミドを持つ大腸菌においては, 染色体DNAに加えて, プラスミドDNAの複製が行われることが必要である. F因子の場合, この調節はF因子上の2つの遺伝子, letAとletDにより調節されている. 本年度は, 遺伝学的に細胞分裂抑制活性を持つ事が示されているLetD蛋白質の多量生産と精製を試みたので報告する.1.LetD蛋白質の多量生産株の作製と精製LetA蛋白質とLetD蛋白質は複合体を形成して強固に結合しており, 精製した複合体を変性させる事なく両者を分離精製することは出来ない. LetD蛋白質を精製するには, letA遺伝子を欠損しletD遺伝子のみを持つ多量生産プラスミドを作る必要がある. このため, 調節可能なtacプロモーターを持ち, 温度感受性のコピー数調節を受ける発現ベクターpkP1500を作製し, これにletD遺伝子とlacI〓遺伝子を挿入することにより, 多量生産プラスミドを作製することに成功した. 現在, このプラスミドを用いて, 鋭意LetD蛋白質の精製を行っている.2.LetD蛋白質の標的蛋白質の同定F因子letA変異株に耐性を示す変異株を分離し, その遺伝解析を行うことにより, LetD蛋白質の標的と推定される, 大腸菌染色体上48分に位置する遺伝子tdiFを同定することが出来た. この遺伝子の変異株を相補し得る組み換えプラスミドを分離し, その欠失変異株を分離し, この遺伝子によりコードされる蛋白質を同定した. 現在, 発現ベクターpKP1500にクローンし, この蛋白質の多量生産株を作製中である.

这项研究是为了阐明大肠杆菌在大肠杆菌中的细胞分裂的诱导机制。在F系数的情况下，某些质粒除染色体DNA外，还必须在F因子上进行调整一年，我们试图制作大量的LETD蛋白质并净化letd蛋白，这表明它具有细胞分裂抑制活性，而蛋白质则是通过形成复合物而形成的，并且不能分离和精制。更改精制的复合物。在这样的温度敏感性中，我们成功地产生了大量的生产质粒。通过分离和执行遗传分析，估计是LETD蛋白的靶标的基因TDIF在48分钟的大肠杆菌染色体中被鉴定出来。通过该基因编码的蛋白质被鉴定为表达载体PKP1500，这是该蛋白质的高生产菌株。