改変型細胞融解性ウイルスを搭載する間葉系幹細胞を用いた難治性消化器癌の治療

使用携带修饰的溶细胞病毒的间充质干细胞治疗难治性胃肠癌

基本信息

批准号：
18591493
负责人：
田川雅敏
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Chiba Cancer Center (Research Institute)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

現在遺伝子導入に利用されているアデノウイルスはタイプ5型であり、その細胞側の主な受容体はcoxsackie-adenovirus receptor (CAR)である。しかし、しばしば消化器癌では、このCAR分子の発現が低下しており、そのため同ウイルスによる遺伝子導入効率が低下している。一方タイプ35型ウイルスの主たる受容体はCD46分子であり、この分子は消化器癌において比較的高発現である。そこで、受容体結合部位であるウイルスのファイバー・ノブ領域をタイプ5型から35型に変換すれば、遺伝子導入効率が向上するはずである。そこで、タイプ35型の当該領域を有し、E1領域に外来性の遺伝子を挿入できるベクター系、ならびにウイルスの増殖に必須のEIAおよびE1B遺伝子の発現を、外来性の転写調節領域での制御を可能にするベクター系を構築した。実際にマーカー遺伝子を組み入れた改変型ウイルスを作製してみると、消化器癌においては、従来のタイプ5型ウイルスに比較してこのウイルスの遺伝子導入効率が優れていた。そこでこのベクター系を用いた細胞融解性ウイルスを搭載する間葉系幹細胞を使用して、抗腫瘍効果を検討するために、まずヒト間葉系幹細胞への遺伝子導入効率、ならびに当該細胞で作用するプロモーターの転写活性化能を検討した。その結果、タイプ5型ウイルスは全く間葉系幹細胞に感染しなかったが、タイプ35型改変型ウイルスの遺伝子導入効率は良好であった。また消化器癌で作用する腫瘍プロモーターのなかで、ミッドカインやサバインビンプロモーターの活性が間葉系幹細胞では低かったのに対し、cyclooxygenase-2プロモーターの活性は高く、当該プロモーターを用いた細胞融解性ウイルスを感染させた間葉系幹細胞は、ウイルスのデリバリーシステムとして有用であると考えられた。

目前用于基因转移的腺病毒是5型，其细胞侧的主要受体是柯萨奇腺病毒受体（CAR）。然而，在胃肠道癌症中，这种CAR分子的表达往往会降低，从而降低了这种病毒的基因转移效率。另一方面，35型病毒的主要受体是CD46分子，该分子在胃肠道癌症中表达相对较高。因此，如果将病毒的纤维旋钮区域（即受体结合位点）从5型转变为35型，基因转移效率应该会提高。因此，我们开发了具有35型相关区域并可以将外源基因插入E1区域的载体系统，以及可以控制病毒繁殖所必需的EIA和E1B基因表达的载体系统我们构建了一个能够实现这一点的载体系统。当他们实际创建了一种掺入标记基因的修饰病毒时，他们发现这种病毒在胃肠癌中的基因导入效率优于传统的5型病毒。因此，为了检查使用该载体系统携带溶细胞病毒的间充质干细胞的抗肿瘤效果，我们首先确定基因导入人间充质干细胞的效率以及对细胞的启动子的转录激活能力。检查了。结果，5型病毒根本没有感染间充质干细胞，但35型修饰病毒的基因转移效率却很好。此外，在胃肠癌中发挥作用的肿瘤启动子中，间充质干细胞中中期因子和萨巴宾启动子的活性较低，而环氧合酶2启动子的活性较高，并且使用该启动子的细胞溶解活性较高。被认为可用作病毒传递系统。